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本人想分离小鼠脾脏T淋巴细胞，不知这方法可不可行 已有1人参与
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将小鼠颈椎脱臼处死，70%酒精浸泡10min，无菌条件下剖开小鼠腹腔取脾，用注射器内芯或者研棒研磨过100目筛网，Hank’s液冲洗，收集分离的脾细胞悬液，2000r/min离心3min，弃上清。加红细胞裂解液8mL，混匀脾细胞，静置5-6min，待红细胞完全破碎，2000r/min离心3min，弃上清去除红细胞，Hank’s液洗1-2遍，用RPMI-1640（含10%胎牛血清）重悬细胞，计数调整细胞浓度为8-10×106个/mL。得到脾淋巴细胞，采用尼龙毛柱法分离，但是参考数据： 样本：小鼠脾脏（T细胞含量在30-40%，B细胞含量在55-60%） 细胞回收率：13-25% B细胞污染率：小于15% 样本：大鼠脾脏（T细胞含量在30-35%，B细胞含量在55-65%） 细胞回收率：大于25% B细胞污染率：小于15% 样本：人或兔外周血 细胞回收率 : 20-30% (人)；25-35% (兔) B细胞污染率：小于5% (人、兔) 回收率太低 可不可以用流式细胞仪对得到的脾淋巴细胞液进行分选，得到T细胞？ |
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2楼2015-07-17 15:22:36
