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江潮

捐助贵宾 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 476.8
散金: 110
帖子: 36
在线: 84.2小时
虫号: 2998958
注册: 2014-02-26
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我们公司有可以连5个不同片段的试剂盒的，你这很好连，很简单。你可以在网上搜下官网说明书来进一步确定是否使用：南京若唯赞生物科技, 一步法多片段克隆试剂盒（C113-01/02）

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11楼2015-06-30 20:49:05

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再闹不给糖

新虫 (正式写手)

应助: 10 (幼儿园)
金币: 3943.8
散金: 540
红花: 2
帖子: 945
在线: 158.6小时
虫号: 3568610
注册: 2014-11-30
性别: GG
专业: 植物病理学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

楼主的重叠pcr是做突变么

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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天空没有留下翅膀的痕迹，我却从中飞过

12楼2015-07-01 20:55:11

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feiadafeng

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 295.5
红花: 1
帖子: 60
在线: 15.3小时
虫号: 2747508
注册: 2013-10-23
专业: 生物材料

【答案】应助回帖

如果可行的话，三个片段做一个约30min的退火过程，并以该混合物为模板进行普通PCR扩增效果也很好。

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13楼2015-07-03 19:24:26

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364785724

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 11.4
帖子: 13
在线: 2.5小时
虫号: 2681502
注册: 2013-09-26
专业: 作物分子育种

【答案】应助回帖

很多文献都是三个一起P的，P多了容易出事，你懂的。

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14楼2015-07-09 22:28:40

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夏夜微风

木虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 1630.5
散金: 409
红花: 4
沙发: 7
帖子: 730
在线: 123小时
虫号: 2703859
注册: 2013-10-07
专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

引用回帖:

4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-06-29 23:46:28
三段一起装省时间，每个片段互相延伸进旁边的片段20bp, 也就是说有40bp重合，然后三个片段混合在一起跑10-15个循环。然后暂停PCR, 加入一对引物，正反引物要结合在拼接后片段最两端的位置。再跑25-30个循环。

能问一下，一般模版要多少量吗？模版太多是不是P不出来啊？我就遇到500bp，1200bp，500bp三段融合，后面得出来的是500bp的片段，现在都不知道怎么回事，怎么会后500bp的呢

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还未成熟，就已老去！

15楼2015-07-26 11:04:01

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