应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重叠延伸PCR的高手，求助！！！！！
252/3返回列表上一页123下一页
查看: 4404  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

江潮

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们公司有可以连5个不同片段的试剂盒的，你这很好连，很简单。你可以在网上搜下官网说明书来进一步确定是否使用：南京若唯赞生物科技, 一步法多片段克隆试剂盒（C113-01/02）
赞一下 回复此楼
11楼2015-06-30 20:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

再闹不给糖

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主的重叠pcr是做突变么

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
天空没有留下翅膀的痕迹，我却从中飞过
12楼2015-07-01 20:55:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiadafeng

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果可行的话，三个片段做一个约30min的退火过程，并以该混合物为模板进行普通PCR扩增效果也很好。
赞一下 回复此楼
13楼2015-07-03 19:24:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

364785724

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

很多文献都是三个一起P的，P多了容易出事，你懂的。
赞一下 回复此楼
14楼2015-07-09 22:28:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏夜微风

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-06-29 23:46:28
三段一起装省时间，每个片段互相延伸进旁边的片段20bp, 也就是说有40bp重合，然后三个片段混合在一起跑10-15个循环。然后暂停PCR, 加入一对引物，正反引物要结合在拼接后片段最两端的位置。再跑25-30个循环。

能问一下，一般模版要多少量吗？模版太多是不是P不出来啊？我就遇到500bp，1200bp，500bp三段融合，后面得出来的是500bp的片段，现在都不知道怎么回事，怎么会后500bp的呢
赞一下 回复此楼
还未成熟，就已老去！
15楼2015-07-26 11:04:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏夜微风

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by feiadafeng at 2015-07-03 19:24:26
如果可行的话，三个片段做一个约30min的退火过程，并以该混合物为模板进行普通PCR扩增效果也很好。

30min的退火过程？那要做多少个循环啊？
赞一下 回复此楼
还未成熟，就已老去！
16楼2015-07-26 11:10:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiadafeng

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 夏夜微风 at 2015-07-26 11:10:12
30min的退火过程？那要做多少个循环啊？...

三个片段等比例混合， 从98度开始30min内降至室温，就完成了退火。并没有直接进行循环。之后的产物作为模板，进行常规PCR。
赞一下 回复此楼
17楼2015-07-27 19:59:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by feiadafeng at 2015-07-27 19:59:16
三个片段等比例混合， 从98度开始30min内降至室温，就完成了退火。并没有直接进行循环。之后的产物作为模板，进行常规PCR。...

这样做有结果吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
好好搞学术
18楼2015-08-16 22:54:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangchong12

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-06-29 23:46:28
三段一起装省时间，每个片段互相延伸进旁边的片段20bp, 也就是说有40bp重合，然后三个片段混合在一起跑10-15个循环。然后暂停PCR, 加入一对引物，正反引物要结合在拼接后片段最两端的位置。再跑25-30个循环。

想问一下，这10-15个循环的体系怎样设置PCR的反应，加入的体系应该是什么。
赞一下 回复此楼
19楼2016-03-28 11:24:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangchong12

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 咆粑 at 2015-06-30 15:10:55
用E-fusion融合酶，直接做链接反应，效力超高。http://www.biophay.com/showpro.asp?id=16&Classid=1仅供参考。

请问片段与片段之间的融合也可以用E-fusion融合酶吗
赞一下 回复此楼
20楼2016-03-28 11:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Daniel_佳 的主题更新
252/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 7/350 2026-07-31 12:10 by syhhffkrym
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 3/150 2026-07-31 12:08 by syhhffkrym
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 u1xkze8ybe 2026-07-30 6/300 2026-07-31 12:05 by syhhffkrym
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +6 锦衣卫寒战 2026-07-28 6/300 2026-07-31 11:27 by syl200707
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +15 1234567wang 2026-07-25 19/950 2026-07-31 08:30 by ZJTJZ
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +8 布布和一二 2026-07-30 8/400 2026-07-31 01:51 by alongwaytogo
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 17/850 2026-07-30 20:10 by kissu88
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了？ +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么？ 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 没消息就是被刷了呗 +13 lambert2014 2026-07-24 14/700 2026-07-29 10:38 by msh145800
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭