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BVDV一段序列扩增测序总出现问题
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| 最近在做BVDV的感染性克隆，楼主将全基因组分为六个片段进行扩增测序（5个片段已扩增测序正确），其中第二个片段在扩增中总出现缺失或终止密码子突变的问题，然后楼主又将该片段分为上下两段扩增，下段测序正确，上段还是出现上述问题。上段在NCBI参考序列为“AGAACGGAAGCTTGGTTACGTCTGGTATACAAAGAATTGCACTCCTGCCTGTCTGCCTAAGAACACAAAGATCATTGGCCCCGGTATGTTTGACACCAATGCTGAGGATGGTAAAATACTGCATGAAATGGGGGGCCACTTGTCGGAGGTACTACTACTCTCAGTGGTAGTGCTGTCTGATTTCGCTCCAGAGACAGCCAGTGTGATATACTTGATTCTTCATTTCTCCATCCCACAAAGACACACTGATATGCAAGACTGTGACAAAAACCAACTAAACCTCACCGTAGAACTCACAACAGCAGAAGTAGTACCAGGGTCAGTTTGGAATTTGGGTAAATACGTTTGTATAAGGCCAGACTGGTGGCCTTATGAGACAGCCACGGTCCTAGTGTTTGAAGAGGTGGGTCAAGTAATTAAGATTGTCTTGAGGGCGTTGAGGGACCTGACCCGCATTTGGACTGCTGCTACAACCACTGCATTCTTGGTGTGTCTGGTGAAGGTGGTGAGAGGCCAAGTGTTGCAAGGTATACTGTGGTTAATACTCATAACAGGGGCACAAGGATTACCAGACTGCAAACCCGACTTTTCATACGCCATAGCCAAAAATGAAGAGATCGGCCAACTTGGAGCCACGGGCCTTACCACTCAGTGGTATGAATACTCGGATGGGATGCGACTGCAGGACGAAACGGTTGTAGTCTGGTGTGAAGATGGAAAGTTCAGATATCTAACTATATGTGAGAGGGAAGCCAGGTATCTGGCTGCTCTACACACAAGAGCCTTACCGACATCTGTAGTATTTACAAAAATTTTAAATGGAAAACAAGAGGACATGGTAGAGATGGATGACAACTTTGAATTCGGTCTTTGCCCATGCGATGCTAGACCCGTGATAAGGGGAAAATTTAATACAACACTTCTGAATGGGCCAGCCTTCCAGATGGTTTGCCCTATAGGATGGACAGGGACCGTAAGCTGCACACTGGCCAATAAGGATACGTTATCCACAACCGTTGTGCGAACGTACAAGCGGGTCAGGCCTTTTCCATATAGGCAGGGCTGTGTCACCCAGAAAATCATTGGGGAGGACCTCTACGACTGTGCCTTAGGAGGGAATTGGACTTGTGTGCCTGGGGATGAACTACGATATGTAGGTGGGCCCGTCGAATCCTGTAAGTGGTGTGGTTACAAGTTCTTGAAAAGTGAGGGTCTGCCACATTTTCCAATTGGCAAATGTAAGCTGGAGAATGAGAGTGGCTACAG”阅读框为“VERKLGYV……”测序用载体为pGEM-Teasy，感受态为Top10，求助大家帮忙分析下，出现上述问题的原因。 |
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