24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 351  |  回复: 5
当前主题已经存档。

helenfang

铜虫 (小有名气)

[交流] 紧急求助:我这样的RAPD-PCR结果能用吗

请问下:我做RAPD所用的模板DNA不是用同一种方法提出来的,所以浓度相差蛮多的,这边测得的OD听说不准,所以虽然测了也没参照,而只是不同的方法挑了一个样品的模板DNA 用不同浓度做PCR,就选能P出来的浓度,其他菌就照着这个浓度做下去了,现在PCR都做完了,发现(其实之前就发现了)貌似有的时候有些模板P不出东西,其实我觉得一般应该是能P出东西来的,因为是用随机引物P的,而且亮度啊什么相差挺大的。现在想想之前是应该将DNA浓度调到差不多的再接着做下去的,但是现在已经来不及了,马上就面临毕业了,我们导师也说我P的还好的,但是我自己觉得不行,想请问下做过RAPD的或者懂的朋友,我这样的情况,那些电泳图还能用吗,能说明问题吗
非常感谢了!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

印象中,RAPD其中有一个分析项目,就是要比较同一位置上条带的亮度差异
所以之前最好做好模板的定量,否则数据出来,说服力自然就……
测OD确实很难完全测准
但是同一批测的话,那个系统误差应该会向一边偏,如果你是做组间的相对比较的话,问题不是太大
测之前最好先开机预热30min
RAPD的重现性本来就不高的
所以有时候确实会P不出来,因而只能用统计学的角度去分析问题
建议最好是同一批样品同一批定量同一批PCR,这样出来的话,就具有比较高的可比性了
2楼2008-07-29 19:18:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helenfang

铜虫 (小有名气)

谢谢楼上,要比较亮度的吗,这个不知道耶
我主要担心的是由于没有定量模板,模板量有差异而导致有些样品P不出来,如果说只是亮度差异倒无所谓,反正做0-1矩阵的时候无所谓亮暗的了,我只要作出聚类图和遗传相似度表就好了
模板稀释了很多倍的,也许稀释之后可能相差就没那么大了,嘿嘿,如果真是那样就阿弥陀佛了
3楼2008-07-29 21:48:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

有点不大记得了~~~不过如果只是0、1的那种的话应该无所谓
不过担心的就是,有时候是因为模板量太少而导致某条带消失
比如某些基因(序列)只是单拷贝的(或者唯一的),刚好其中一条带就是这个基因(片段),那么就有点危险,但是只要模板量不是太少,那应该没问题
ug级别的应该就没问题了
数百ng就很危险了
4楼2008-07-29 22:21:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helenfang

铜虫 (小有名气)

恩,你说的很有道理,谢谢啦
5楼2008-07-30 18:34:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

不客气,多多交流~~~
6楼2008-07-30 22:00:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 helenfang 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +3 手机用户 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:39 by lbsjt
[考研] 328求调剂 +6 嗯滴的基本都 2026-03-27 6/300 2026-03-27 16:49 by sanrepian
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +5 SYA! 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 349求调剂 +5 杰斯塔里斯 2026-03-21 5/250 2026-03-27 00:31 by wxiongid
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +5 材料cailiao 2026-03-21 5/250 2026-03-26 20:41 by fmesaito
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
信息提示
请填处理意见