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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 100金币求助：聚丙烯酰胺凝胶电泳+2008年10月1日
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wyong186

木虫 (正式写手)

[资源] 100金币求助：聚丙烯酰胺凝胶电泳+2008年10月1日

请问:我的实验过程中需要20%的聚丙烯酰胺，分离DNA,那我应该配多大浓度的准备液呢？配比应该是多少呢？一般都采用什么染料呢？谢谢！

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-14 at 10:40 ]
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1楼 2008-07-29 15:27:24
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fkbp23

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
不知你用此胶分离什么，我这有一个配方，使分离DNA的。
试剂                         20%聚丙烯酰胺凝胶所用试剂的体积/ml
30%丙烯酰胺            66.6
水                           12.7
5倍TBE                    20.0
10%过硫酸铵            0.7
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2楼2008-07-29 15:43:14
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fkbp23

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
补充：
每100ml此凝胶溶液总加35微升TEMED
染色方法要看你是分离什么了，DNA可用EB，蛋白用考马斯亮蓝，银染等等。
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3楼2008-07-29 15:46:16
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖
这么高浓度？
我试过配35%的stock，40%的stock也是可以的（Acr：Bis=39：1）
这种stock也有得卖
核酸用银染法，可以直接在胶上看，或者用EB一类的，可以紫外成像
蛋白……逃不离考染一类的了，呵呵~~
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4楼2008-07-29 16:19:05
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playboy723

金虫 (正式写手)

★★★ 三星级,支持鼓励

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):thx
你要分离什么呢   DNA还是蛋白？
蛋白我熟   DNA不熟
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5楼2008-08-01 17:34:15
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hanjun80

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
30%的凝胶储液足够

蛋白质凝胶电泳可以用考马氏亮兰或者银染染色

核酸凝胶电泳可以用EB染色，EB用途广泛，但是EB毒性很大，要小心哦
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6楼2008-08-01 18:58:04
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fruit

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
胶的贮备液好配，染色最好用银染，对蛋白、DNA都合适，而且分标率高。
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7楼2008-08-01 22:36:01
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BigJake

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
，请楼主参考郭尧君主编的《蛋白质电泳实验技术》，这本书在我们小木虫里面有的，祝顺利！
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8楼2008-08-02 00:32:52
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lvpeng_ujs

新虫 (小有名气)
可以用银染，灵敏度高一点，不过同蛋白的银染有一些区别！
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9楼2008-08-05 16:27:42
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peny03

银虫 (小有名气)
建议使用50的储备液：
配方:5×TBE(贮存液)：0.45mol/L Tris碱（Tris溶液不能高压灭菌）0.45mol/L硼酸0.01mol/L EDTA(高压蒸汽灭菌后室温保存）;50%凝胶储存液比例（丙：双丙39：1）
凝胶配方：50%凝胶储存液  200ml
               5XTBE               50ml
               尿素                  210g（最好加尿素，PAGE和agarose不一样，不加尿素跑不动或者条带很模糊）
              加去离子水到500ml
跑完了之后可以在254nm紫外下可以看到紫色核酸条带。

[ Last edited by peny03 on 2008-8-6 at 09:29 ]
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10楼2008-08-06 09:17:50
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yujie8586

银虫 (小有名气)
我做过6%的非变性聚丙烯酰胺凝胶时是用来分离100－1500bp的DNA片段，具体配方：         5XTBE               10ml
               20%丙烯酰胺       15ml
                水                          25ml
                10%过硫酸铵           350微升
                 TEMED                     17.5微升

跑完了之后银染。效果还可以！

[ Last edited by yujie8586 on 2008-8-6 at 15:04 ]
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11楼2008-08-06 15:00:55
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