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神经嘻嘻铁虫 (初入文坛)
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[求助]
一些做transwell肝癌细胞（7703)侵袭的问题！求大神指点。
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最近正学着做Transwell，用的24孔板是Corning的Transwell小室，基质胶是BD的Matrigel胶（说明书说是9.8mg/ml的浓度）。我主要做肝癌细胞的侵袭实验，小室铺7703肝癌细胞，下面24孔板里铺细胞A，研究肝癌细胞在A的影响下细胞侵润率。 我上室的细胞浓度为1*10^5，每孔100微升，用无血清的1640配。下室细胞也是1*10^5，每孔500微升，用10%FBS+DMEM配。Matrigel胶我不确定用多少稀释，就试了一下1:3和1:9，每孔100微升，培养24h，用棉签去除基质胶和上层培养基，PBS洗，10%福尔马林固定20min，PBS洗，0.1%结晶紫染色20min，DDW洗3次，棉棒擦干。 问题： 我之前看文献说肝癌细胞能贴壁在transwell底部，但是染色后显微镜下我一个细胞都没有看到？？难道是基质胶的稀释度不对么？？？下层细胞我倒是看到死了很多，但是A和7703长得一样，所有我不能确定它是否侵袭下去了。 请大神们帮我看看，到底哪一步骤出了问题！！！ 小女子跪谢啊！！！！ |
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