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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助:杂交技术
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yululu

铜虫 (初入文坛)

[交流] 求助:杂交技术

最近在看杂交方面的文献, 在DNA变性后加入探针,然后复性, 一开始变性的DNA两条单链是不是也有可能互相复性啊,这样会不会对检测结果造成影响啊,请高人指点一下子
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1楼 2008-07-28 10:29:17
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
杂交液中一般都含有甲酰胺的，这是破坏氢键形成的。楼上的说的对，杂交液的环境不适合长链的DNA单链复性的，DNA越长，所需要的复性条件越复杂。而且，单链DNA也可能会因为自身链内氢键的形成，更难与原来的单链复性。相对来说，短的多的探针不易形成链内氢键，容易在局部与匹配的DNA链形成双链，比较稳定，即使提高洗膜的温度，只要是特异性结合的，一般很难洗掉的，非特异性的结合在提高了温度后容易洗脱，减少了杂交的背景。
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位卑未敢忘忧国。
4楼2008-07-29 00:53:43
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liulangnmg

铁虫 (小有名气)
★
yululu(金币+1,VIP+0):谢谢
不会造成影响。
因为在杂交环境中，通常都是需要恒温的，比如42度或者60度，同时，杂交液的离子环境也不允许长的DNA片段间相互复性，而短的探针则可以。
当然，上述也是需要一个合适的条件，当条件不合适时，就会出现你所说的情况。
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2楼2008-07-28 15:43:25
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yululu

铜虫 (初入文坛)
好的,谢谢啦,那个送金币怎么送啊,
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3楼2008-07-28 16:40:49
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yululu

铜虫 (初入文坛)
您好,我想请教一下,在杂交捕获试验中用到一种DNA-RNA特异性抗体,不知道这种抗体的获得是不是很麻烦,一般我们用到的抗体好像都是蛋白抗体,谢谢啦
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5楼2008-07-29 08:44:57
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