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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB无目的条带，actin是正常的。
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曾鹏

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by amido at 2015-06-12 22:57:20
原帖无法再编辑，这里补充下。我的目的蛋白的膜非常干净，一方面原因是抗体完全没效果，另一原因，是没有相关蛋白。
转膜：我用的是60V, 2h，没有注意电流是多少。请教同学后说有可能转膜转过了，我明天打算尝试恒 ...

我们转膜是275 mA（此时电压>80 V），小分子量1 h，大分子量90 min。分子量为51 kDa，或许真的存在转膜转过了的问题。
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11楼2015-08-17 11:19:34
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安馨儿

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amido(youlinglyw代发): 金币+5, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩 2015-08-18 20:18:05
目的蛋白和actin大小相差不大，所以应该不是转膜的电流和时间问题。你的actin跟目的蛋白的抗体都是兔源的吗？如果不是，需要首先确认一下二抗有没有问题。另外，再次加大上样量或者提高抗体浓度试试吧。感觉操作出问题的可能性不大，建议仔细查阅一下说明书吧，看看有没有漏掉的重要信息。
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成功需要1万小时
12楼2015-08-17 22:09:51
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凉若馨昔

金虫 (小有名气)
第一，看看自己抗体的属性，是否存在标错问题；第二，目标蛋白表达量较少，可以选择加大上样量再做后续试验安排。因为你的actin已经标出来了，所以你的胶和转膜时间应该没多大问题，其他的你就在找找原因吧，祝好运~~
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不做谁的谁，只做你自己~
13楼2015-08-22 00:14:50
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