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多糖糖基化和糖链分析常规问题 已有2人参与
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Q: 如何从糖蛋白中释放N-多糖糖链? A: 目前普遍采用2种技术用于释放糖蛋白N-多糖糖链用于糖基化分析 - 肼解和内切糖苷酶处理。《糖基化分析指南》涵盖了一些在选择这些释放方法时的注意事项。 Q: 如何制止唾液酸从糖链上掉落? A: 唾液酸是棘手的事情。根据我们的经验，多糖样品纯度越高，唾液酸残余就越容易掉落。虽然有些灵敏的预防措施，比如： 避免pH酸性和升温。尽可能保持pH在6-9范围，温度低于30°C。 在使用离心或旋转蒸发干燥糖链样品时应小心操作，保持温度低于25°C。冷冻干燥(冻干)对于防止唾液酸降解更为有效，但存在更大的风险是，在真空放空时，可能导致样品全部损失。 Q: 对于多糖糖链分析而言，最佳的荧光标记是什么? A: 下表展示了在使用HPLC, CE 和MS进行糖基化分析时,最常用的荧光标记: 多糖荧光标记 主要应用 荧光波长和常规分析方法 2-AB (2-氨基苯甲酰胺) 使用HPLC/MS分析寡糖 Λex = 320 - 360 nm, Λem = 420 nm HPLC (amide, C18, AEX, HPAE-FD, PGC), ES-MS, MALDI-MS 2-AA (2-氨基苯甲酸) 使用HPLC/MS分析寡糖 使用HPLC分析单糖 Λex = 320 - 360 nm, Λem = 420 nm Oligosaccharides: HPLC (amide, C18, AEX, PGC), ES-MS, MALDI-MS Monosaccharides: HPLC (C18) APTS (8-氨基芘-1,3,6-三磺酸) 使用CE分析寡糖 Λex = 455 - 488 nm, Λem = 510 - 520 nm CE AA-Ac (3-(乙酰氨基)-6-氨基吖啶) 使用HPLC分析寡糖 Λex = 382, 445 nm, Λem = 525 nm HPLC (amide, C18, AEX), ES-MS, MALDI-MS DMB (1,2-二氨基-4,5-亚甲二氧基苯) 使用HPLC分析人以及非人类唾液酸 Λex = 373 nm, Λem = 448 nm HPLC (C18) 关键词: AEX = 阴离子交换, HPAE-FD = 强碱性阴离子交换带荧光检测, PGC = 多孔石墨烯, HPLD = 高效液相色谱, MS = 质谱 , MALDI = 基质辅助激光解吸附质谱, ES = 电喷雾质谱, CE = 阳离子交换高效液相色谱 |
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