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zhangya

金虫 (正式写手)

[交流] 有没有朋友知道荧光分光光度计的参数的?

我因为用到这个仪器,想请教一下大家下列参数的意义:
Excitation wavelength(nm):
Emission wavelength(nm):
Excitation slit(nm):
Emission Filter:可以选择430nm cut-off; 515nm cut-off等等

尤其是后两个参数不了解意义,请用过的朋友给些详细的解释,非常感谢。

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 20:47 ]
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dameng19831128

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
zhangya(金币+5,VIP+0):回答的不错。
Excitation wavelength 荧光激发波长
Emission wavelength 荧光发射波长
Excitation slit 激发狭缝
Emission Filter发射滤光片
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荧光分光光度计的使用操作
一、        打开电脑主机电源。
二、        打开F4500主机电源。间隔10秒后,按下氘灯开关按键(不得超过5秒),当黄灯亮起不熄灭时,打开主板电源。
三、        点击FL solutions图标,打开仪器工作程序窗口。
四、        将待测溶液倒入荧光比色皿,用柔软的滤纸(最好为擦镜纸)拭去荧光比色皿外侧溶液,打开仪器盖,将荧光比色皿放入仪器中的专用位置,盖好盖子。
五、        点击“方法”图标。在打开的框图中,点击“一般” 图标,选择“波长扫描”方式;点击“仪器”图标,选择扫描方式为“发射”,固定激发波长为某一整数值X,发射扫描开始波长为“X + 20”nm,发射扫描结束波长为“2X-20”nm,但发射扫描结束波长最大不超过900nm。
六、        点击“测量”图标,开始进行发射光谱扫描。仪器结束扫描后自动给出相应的测量参数和最大发射波长及对应的荧光强度。
七、        点击“方法”图标。在打开的框图中,点击“仪器”图标,选择扫描方式为“激发”,发射波长选择刚才所得的最大发射波长数值Y,激发扫描开始波长为“1/2Y + 20”nm,激发扫描结束波长为“Y-20”nm。
八、        点击“测量”图标,开始进行激发光谱扫描。仪器结束扫描后自动给出相应的测量参数和最大激发波长及对应的荧光强度。
九、        将激发波长设为“八、”确定的数值。重复“五、”至“八、”的步骤。直至获得的激发波长和发射波长的数值不再明显改变为止。
十、        点击“方法”图标,在打开的框图中,点击“一般” 图标,选择“光度计”方式,选择“使用样品表”;点击“定量”图标,“定量”为波长,“校正曲线”为1级,“浓度”为mg/L,“小数点后位数”为1;点击“仪器”图标,在Ex 和Em项填写获得的最佳激发波长和发射波长数值,“重复”为3,“波长”为两者波长固定;点击“标准”图标,“样品数”为6,栏中分别输入相应溶液的浓度。点击“确定”。
十一、        点击“样品”图标,选择测定的样品数目,点击“确定”。
十二、        将待测溶液装入荧光比色皿,放入仪器荧光架。点击“测量”,按提示逐步操作。记录测量样品溶液的荧光强度、浓度、回归方程、相关系数及样品溶液浓度。计算含量。
十三、        工作结束后,清洗荧光比色皿,关闭仪器工作程序窗口。
十四、        顺序关闭主板电源、主机电源。
2楼2008-07-21 18:03:59
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zhangya

金虫 (正式写手)

dameng19831128朋友,非常感谢解释。还想就参数问些问题,望再解释一下。
假定我测出来的Exitation wavelength:460 nm, Emission wavelength: 560 nm,此时,我设置emission filter是515 nm cut-off和430 cut-off,所得的荧光值是不同的,我测试的是430 cut-off更大,但是我不能理解的是,我的emission wavelength是560 nm,而在荧光值的受emission filter的影响很大,这个作何解释,而且选择哪种才更合理呢?目前我对此比较迷惑。
3楼2008-07-21 18:24:29
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dameng19831128

银虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
因为荧光的波长比激发光长,所以为使荧光透过,激发光不透过而避免干扰,应使用515 nm cut-off,它是允许低于515nm的光通过,截止高于于515nm的光
4楼2008-07-23 17:41:32
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