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spiderbp

金虫 (正式写手)

[求助] 脂质体制备,过滤遇到问题 已有1人参与

不知道是不是属于纳米范畴,现在在做脂质体

请教大侠,
现在按Biacor (SPR仪器公司)的要求制作脂质体,用的是Avanti提供的lipid,滤膜和小过滤设备。
实验要求50nm滤膜,但我做的脂质体很难通过。给多大压力都不通过,压力过大膜就破掉了。

本实验步骤如下:
       称取76mg POPC溶于10ml氯仿,
       旋转蒸发蒸出氯仿,然后真空泵旋蒸2h。
       得到的一层薄膜用缓冲溶液溶解,混悬,
       放到液氮里冷冻,再解冻,反复5次。
       混悬液用注射器在过滤装置上透过50nm滤膜。
此时遇到问题,因为50nm根本过不去,我就先用100nm膜过滤,但还是过不去。像堵住了一样,使劲推也不进行最后膜就破掉了。
      1.以为是脂质体体积太大了,我就将混悬液稀释了3倍。
      2.想让脂质体均匀,我又用超声波超声了5min
但结果无济于事。

请有经验的大侠们告诉我一下,以上步骤是不是哪儿出了问题。或者该怎么做才对,谢谢大家!
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多糖合成
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genhunter

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还是要先过大的, 200 nm,多次,然后逐步减少孔径.
离成功还差一点
2楼2015-05-31 20:25:13
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spiderbp

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by genhunter at 2015-05-31 20:25:13
还是要先过大的, 200 nm,多次,然后逐步减少孔径.

按道理来说,脂质体用缓冲溶液溶解一后就会成为双层球状结构。如果过膜,会不会把球状结构又给打碎啊?
多糖合成
3楼2015-06-03 08:40:17
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genhunter

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by spiderbp at 2015-06-03 08:40:17
按道理来说,脂质体用缓冲溶液溶解一后就会成为双层球状结构。如果过膜,会不会把球状结构又给打碎啊?...

会的。水化时先形成具多层双脂膜的脂质体,粒径较大。要用机械方法逐步将粒径(和层数)逐步减小。整个过程是把结构给打碎,然后重组的过程。建议读一下有关专著。
离成功还差一点
4楼2015-06-03 09:41:06
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