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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 油菜种子RNA提取
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十一月

银虫 (正式写手)

[交流] 油菜种子RNA提取

有人提取过油菜干种子的RNA吗？请教大虾，我现在提取的效果不好，量少，降解严重。请高人指点。
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1楼 2008-07-20 22:55:14
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ljwei_163

金虫 (正式写手)

可能由于RNA酶降解严重

由于 RNA 酶存在所有的生物中，并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境，因此建立一个无 RNA 酶的环境对于制备优质 RNA 很重要。
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2楼2008-07-21 10:25:06
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十一月

银虫 (正式写手)
是的，清洁的环境的确很重要。我用的是CTAB法，其中配制缓冲液的时候用到Tris,由于Tris与DEPC会起反应，所以你们在配制该缓冲液的时候采用什么方法避免这个问题？谢谢
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3楼2008-07-21 10:32:29
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raindrop8316

金虫 (正式写手)
Tris缓冲液当然是用新买的Tris和HCl配了。称量用的药勺用DEPC处理过，或者直接在酒精灯上烧一下。用DEPC水配制。这样配成的缓冲液直接灭菌，不需要用DEPC处理，也不能用DEPC处理。我以前用LiCl法提RNA，Tris一直这样配的，提的RNA一直没有降解过。
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书到用时方恨少 钱到月底不够花
4楼2008-07-21 16:21:06
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十一月

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by raindrop8316 at 2008-7-21 16:21:
Tris缓冲液当然是用新买的Tris和HCl配了。称量用的药勺用DEPC处理过，或者直接在酒精灯上烧一下。用DEPC水配制。这样配成的缓冲液直接灭菌，不需要用DEPC处理，也不能用DEPC处理。我以前用LiCl法提RNA，Tris一直这 ...

问题是pH8.0的话，你所用的pH值调节器有RNase，而这个又不能高温高压灭菌。难道你是用试纸定pH值的吗？
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5楼2008-07-21 23:14:52
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raindrop8316

金虫 (正式写手)
回复楼上：
我没有测定pH值，而是按照书上的缓冲液的配方配的。一般生物化学或者分子生物学试验书上都有Tris-HCl缓冲液配方，你找pH 8.0的，配出来的pH值就是8.0，根本不需要调的。
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书到用时方恨少 钱到月底不够花
6楼2008-07-22 10:08:33
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