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放线菌 已有1人参与
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| 谁做过放线菌DNA提取？都用什么方法啊！ |
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【答案】应助回帖
| 接种50 μL 20%甘油保存的放线菌孢子（不产孢的菌株可用菌丝体）至5 mL的TSBY （Oxide胰胨豆汤粉30 g，Oxide酵母粉5 g，蔗糖103 g，蒸馏水1000 ml）液体培养基，置于30℃摇床培养48小时，离心收集菌体待用。以500 μL溶菌酶溶液（2mg/ml）重新悬浮50 mg菌丝体，37℃温育约30 min，或温育至细胞成为半透明状。加入250 μL 2% SDS，混合振荡约1 min直到溶液的粘度显著下降，然后加入500 μL中性苯酚/氯仿，混合振荡均匀后，12000 r/min离心5 min，移取上清液，弃去白色中间层。用中性苯酚/氯仿重复二次抽提直至看不见（或非常少）中间层为止，最后加入0.1倍体积的3 M醋酸钠（pH自然），混合后加入1倍体积的异丙醇（或2.2倍体积的无水乙醇），再次混合后在室温下放置5 min（或者在-20 ℃放置30 min），12000 r/min离心，弃去上清液，用70%乙醇洗涤DNA沉淀两次，最后弃去所有上清液，待乙醇挥发后，溶解于一定量TE缓冲液中。如所得到的基因组DNA还需进行酶切等后续操作，则溶解于纯水中。亲，这是我在网上看到别的虫友分享的方法，挺好的。 |
2楼2015-06-03 10:02:47
3楼2015-06-03 11:24:05
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4楼2015-06-03 15:09:34
