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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 请教两个关于HPLC的问题，谢谢
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superwheat

银虫 (正式写手)

[交流] 请教两个关于HPLC的问题，谢谢

我需要做一个关于阿霉素的检测。
首先是一个关于流动相的问题，参考文献用的是C18反向柱，流动相用到了磷酸氢铵作为缓冲盐，并加入了三甲胺。胺盐和钠盐的磷酸盐对于流动相来说有什么不同呢？还有三甲胺的作用是什么呢？

其次是样品处理的时候沉淀蛋白的方面，酸沉淀比较多，但不同的酸效果又没有不同呢？实验室其他人常用高氯酸，但我的文献用的是磺基水杨酸。另一篇文献用硝酸银沉淀蛋白，又是否有什么特别的原因呢？

液相方面我是新手，希望得到一些帮助，谢谢。
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1楼 2008-07-18 18:54:48
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yanghanrong

金虫 (正式写手)
★
superwheat(金币+1,VIP+0):非常感谢
引用回帖:
Originally posted by superwheat at 2008-7-20 13:41:
我有看到一些说法，是说三甲胺三乙胺这类东西能不用就不用，因为会抑制样品信号，影响定量结果，这个说法是不是正确呢？

不是完全对，这就要看我们所用的什么检测器啊，如果是UV那是没有什么影响的，如果是MS做检测器的话，所添加的扫尾剂一般是建议用容易挥发气化的物质，比如氨水，甲酸氨之类的。
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7楼2008-07-20 15:33:39
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885511

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
superwheat(金币+3,VIP+0):非常感谢
钠盐的磷酸盐是形成buffer的缓冲体系的
三甲胺是典型的扫尾剂了
样品处理要根据文献和处理方法的考察比如回收率等合格就行了
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2楼2008-07-18 20:22:55
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superwheat

银虫 (正式写手)
非常感谢885511。

扫尾技的意思是否就是减少拖尾呢？

我以前也用过磷酸钠盐的缓冲体系，不过这次文献用的是磷酸的铵盐，觉得有点奇怪，是否铵盐比钠盐有什么优势？
此外，我要比较回收率，是不是把标准品直接加到组织块里面，匀浆和沉淀蛋白，跑个HPLC来比较一下回收率呢？
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3楼2008-07-18 22:33:42
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885511

木虫 (著名写手)
★
superwheat(金币+1,VIP+0):非常感谢
现在做药代最好做LCMS比较好
你可以先在LC摸好条件，但是有磷酸盐等不挥发性盐不能上LCMS
做个加样回收率等方法学验证是有必要的，也是设计分析方法的基本思路
正好可以多讨论讨论
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4楼2008-07-19 08:38:50
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