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superwheat

银虫 (正式写手)

[交流] 请教两个关于HPLC的问题,谢谢

我需要做一个关于阿霉素的检测。
首先是一个关于流动相的问题,参考文献用的是C18反向柱,流动相用到了磷酸氢铵作为缓冲盐,并加入了三甲胺。胺盐和钠盐的磷酸盐对于流动相来说有什么不同呢?还有三甲胺的作用是什么呢?

其次是样品处理的时候沉淀蛋白的方面,酸沉淀比较多,但不同的酸效果又没有不同呢?实验室其他人常用高氯酸,但我的文献用的是磺基水杨酸。另一篇文献用硝酸银沉淀蛋白,又是否有什么特别的原因呢?

液相方面我是新手,希望得到一些帮助,谢谢。
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yanghanrong

金虫 (正式写手)


superwheat(金币+1,VIP+0):非常感谢
引用回帖:
Originally posted by superwheat at 2008-7-20 13:41:
我有看到一些说法,是说三甲胺三乙胺这类东西能不用就不用,因为会抑制样品信号,影响定量结果,这个说法是不是正确呢?

不是完全对,这就要看我们所用的什么检测器啊,如果是UV那是没有什么影响的,如果是MS做检测器的话,所添加的扫尾剂一般是建议用容易挥发气化的物质,比如氨水,甲酸氨之类的。
7楼2008-07-20 15:33:39
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885511

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
superwheat(金币+3,VIP+0):非常感谢
钠盐的磷酸盐是形成buffer的缓冲体系的
三甲胺是典型的扫尾剂了
样品处理要根据文献和处理方法的考察比如回收率等合格就行了
2楼2008-07-18 20:22:55
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superwheat

银虫 (正式写手)

非常感谢885511。

扫尾技的意思是否就是减少拖尾呢?

我以前也用过磷酸钠盐的缓冲体系,不过这次文献用的是磷酸的铵盐,觉得有点奇怪,是否铵盐比钠盐有什么优势?
此外,我要比较回收率,是不是把标准品直接加到组织块里面,匀浆和沉淀蛋白,跑个HPLC来比较一下回收率呢?
3楼2008-07-18 22:33:42
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885511

木虫 (著名写手)


superwheat(金币+1,VIP+0):非常感谢
现在做药代最好做LCMS比较好
你可以先在LC摸好条件,但是有磷酸盐等不挥发性盐不能上LCMS
做个加样回收率等方法学验证是有必要的,也是设计分析方法的基本思路
正好可以多讨论讨论
4楼2008-07-19 08:38:50
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