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秦俊超527

新虫 (小有名气)

[求助] 关松荫《土壤酶及其研究法》中磷酸酶活测定中的一点困惑 已有2人参与

在根据关松荫的方法测磷酸酶活的时候,采用磷酸苯二钠比色法1,实验原理是根据苯酚与氯代二溴对苯醌亚胺试剂反应显色,但是我按照观松荫方法实验并没显色,做标准曲线时是一条水平线。求解释,求解决方法。
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hudong

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 秦俊超527 at 2015-06-07 10:34:19
关松荫的磷酸苯二钠比色法二,主要区别就是显色剂改了,在做标准曲线时,显色明显,但是比色时吸光度变化很快,因而测出的值没有意义。在较长一段时间内(一天),颜色变化从红变黄再变绿。
  针对这个问题,我在做 ...

我也在做这个,请问是在加入显色剂,25分钟后溶液稳定,再定容?还是在加入显色剂,定容后,溶液稳定25分钟后再比色?溶液显什么颜色?另外在制取标准曲线时,加入的0.25ml缓冲液是氯化铵-氢氧化铵缓冲液吗
11楼2016-03-30 14:08:17
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我没有具体测过这种酶。但是酶活性没有,一般是就几种情况,酶过期失活了,活性因子缺失,存在抑制剂,底物不合格,能够不能说一下具体情况。
3楼2015-06-01 13:10:17
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秦俊超527

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by calorimetry at 2015-06-01 13:10:17
我没有具体测过这种酶。但是酶活性没有,一般是就几种情况,酶过期失活了,活性因子缺失,存在抑制剂,底物不合格,能够不能说一下具体情况。

不是没有酶活性。
       根据关松荫的方法,我测土壤磷酸酶的活性。采用磷酸苯二钠比色法1.原理是磷酸苯二钠在磷酸酶的酶促反应下产生酚,酚与显色剂2,6-二溴苯醌氯酰亚胺反映显色。做标准曲线时不同浓度的酚与显色剂反应,显色,比色,得到与浓度相应的吸光度值。现在的问题是在做标准曲线时,该有的显色没有,比色时,不同浓度的酚溶液,吸光度值一样。所以样品测量就进行不下去。
      之后我又用了关松荫的磷酸苯二钠比色法二,主要区别就是显色剂改了,在做标准曲线时,显色明显,但是比色时吸光度变化很快,因而测出的值没有意义。在较长一段时间内(一天),颜色变化从红变黄再变绿。
      这是我毕业论文的一部分,都快愁死了,很需要帮助,请前辈赐教。
4楼2015-06-01 18:01:28
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

能不能告诉你用的那本酶活力测定实验手册,说出书名即可,我自己会去查。

我现在没有去图书馆,手里有:(德)B.施特尔马赫 著,钱嘉渊 译,酶的测定方法,中国轻工出版社,1992,其中没有磷酸酶的测定。
5楼2015-06-02 12:06:31
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