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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 帮忙看下凝胶电泳图 谢了
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ningxinfei-2007

[交流] 帮忙看下凝胶电泳图 谢了

前几天跑了凝胶电泳 图像的有些结果不理想 希望各位高手帮忙分析一下
   我是用来验证引物的特异性的 目的片段为100多bp  目的菌跑出来了 但是用来检测的其他一个细菌也出现了条带 只不过不是在目的片段长度的地方 而是在300bp和>500bp的地方出现了两条暗的条带
   各位帮忙看看是什么原因可能引起
   我是新手 不是很明白 望各位高手帮忙
    先谢过了
    附上凝胶电泳图
  
    左边一个条是Marker
    第二条是目的菌
    第四条是出现条带的其他菌
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1楼 2008-07-14 16:46:46
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wyzl2007

金虫 (小有名气)
要帮忙还需要支付金币
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2楼2008-07-14 23:18:57
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界
第一、大小是不是你说的100多bp，不清楚你说的是什么marker，你应该标一下marker条带的分子量。
第二、你应该设一个PCR的阴性对照，也就是不加模板，其他相同的一个对照。
第三、左起第三泳道是不是你的目的菌扩增结果？
第四、你的引物特异性好像不太好，非目的菌泳道中的的两条带也是扩增的结果，非特异性扩增。
第五、你应该说一下你的退火温度，可以试着提高一下退火温度，再减小延伸的时间，15秒左右就足够了。

[ Last edited by xyklmu on 2008-7-15 at 03:28 ]
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位卑未敢忘忧国。
3楼2008-07-15 03:26:15
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ningxinfei-2007

非常感谢xyklmu的无私帮助
marker是50bp的 最下面是50 以上依次是100 150  第三条也是其他菌 我的退火温度是55度 延伸时间是1min
阴性对照用生理盐水可以吗
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4楼2008-07-16 14:23:47
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tcxuefeng

金虫 (正式写手)
显然不能用生理盐水,否则没有意义了.
和你目的基因的加法一样,只是不加模板.
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5楼2008-07-18 08:45:21
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Frank2007198

铜虫 (小有名气)
用生理盐水为什么没有意义？我都是加去离子水代替模板当阴性对照的
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6楼2008-07-20 11:54:42
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ningxinfei-2007

我是用生理盐水来代替模板 就是其他的成分完全一样 只不过不加DNA模板 而是加生理盐水 这样不是也可以用来当作是阴性对照吗
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7楼2008-07-21 00:49:57
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