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carolyn_cat新虫 (小有名气)
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【摘要】 目的 旨在在HEK293细胞系和Flp-IN-CHO细胞中构建稳定表达超极化激活环核苷酸门控钾通道亚型4(HCN4)的稳定细胞系，并对其通道的表达进行鉴定。 方法 利用Lipofectamine2000将pCDNA3．1(+)-HCN4分别转染进入HEK293细胞和Flp-IN-CHO细胞中，并通过G418和潮霉素B分别对其进行筛选，获得阳性单克隆细胞系，采用全细胞膜片钳技术对筛选出的单克隆细胞进行表达水平的鉴定，测定pCDNA3．1(+)-HCN4 所介导的快速激活延迟整流钾电流(If)。结果 全细胞膜片钳实验在筛选出的单克隆细胞中记录到超极化激活的非选择内向阳离子电流(If)。 结论 该方法有效地将目的基因转染进入HEK293细胞和Flp-IN-CHO细胞中，并能稳定表达HCN4通道蛋白。HCN4通道基因重组载体的成功构建为进一步研究该离子通道的电生理功能及在疾病治疗方面的潜在应用价值奠定了基础。 |
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carolyn_cat
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4楼2015-05-11 15:29:26
genhunter
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【答案】应助回帖
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【摘要】 目的 旨在在HEK293细胞系和Flp-IN-CHO细胞中构建稳定表达超极化激活环核苷酸门控钾通道亚型4(HCN4)的稳定细胞系，并对其通道的表达进行鉴定。 Abstract We established cell lines that express ultra polarized cAMP activated gate control potassium channel subtype 4(太专业了lz自己翻译核对吧) (HCN4) from HEK293 and Flp-IN-CHO parent lines. 方法 利用Lipofectamine2000将pCDNA3．1(+)-HCN4分别转染进入HEK293细胞和Flp-IN-CHO细胞中，并通过G418和潮霉素B分别对其进行筛选，获得阳性单克隆细胞系，采用全细胞膜片钳技术对筛选出的单克隆细胞进行表达水平的鉴定，测定pCDNA3．1(+)-HCN4 所介导的快速激活延迟整流钾电流(If)。 Method: We used Lipofectamine 2000-mediated transient transfection to introduce pCDNA3.1(+)-HCN4 plasmids into HEK293 and Flp-IN-CHO parent lines, respectively, followed by G418 and B selections , to obtain positive colonies. We then used whole cell membrane clumping technique to assess the level of gene expression by measuring pCDNA3．1(+)-HCN4-dependent 快速激活延迟整流钾电流 (太专业了lz自己翻译吧) channel activities (If) . 结果 全细胞膜片钳实验在筛选出的单克隆细胞中记录到超极化激活的非选择内向阳离子电流(If)。 Results Whole cell membrane clumping technique was used successfully to record the ultra polarized activation of non-selective inward cation current on monoclonal stable cell lines. 结论 该方法有效地将目的基因转染进入HEK293细胞和Flp-IN-CHO细胞中，并能稳定表达HCN4通道蛋白。HCN4通道基因重组载体的成功构建为进一步研究该离子通道的电生理功能及在疾病治疗方面的潜在应用价值奠定了基础。 Conclusion: This methodology can be used to introduce target genes into HEK293 and Flp-IN-CHO cells by transfection and stably express HCN4 channel protein. The construction of expression plasmid for HCN4 gene and stable lines pave the road for further electrophysiology studies for its normal function and potential application in treating certain diseases. |
3楼2015-05-11 15:25:29
genhunter
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【答案】应助回帖
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carolyn_cat: 金币+55, 翻译EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-05-11 15:43:29
carolyn_cat: 金币+55, 翻译EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-05-11 15:43:29
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oh. We established cell lines that express ultra polarized cAMP activated gate control potassium channel subtype 4(太专业了lz自己翻译核对吧) (HCN4) from HEK293 and Flp-IN-CHO parent lines and characterized the channel activity on these lines. |
5楼2015-05-11 15:41:44
carolyn_cat
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