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wwfifa

铜虫 (小有名气)

[交流] 有关双酶切

请高手赐教,宝生物公司所出内切酶EcoRI和NotI能否双酶切啊,酶切效果怎样啊,还有就是由这两个酶切的产物,定向克隆到pET28a表达,其阅读框是否会发生变化啊,谢谢各位高手了。
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xyklmu

至尊木虫 (知名作家)

虫眼看世界

这两个酶都使用宝生物公司的H反应缓冲液,应该是可以进行双酶切的。
要设立两个单酶切的对照,如果单酶切切得很完全,应该认为双酶切也是完全的,还有两个酶识别位点之间有34个碱基的片段释放出来,从大小上也可以判断是否双酶切了。
阅读框的问题,就看你在克隆你的基因的时候如何设计带有酶切位点的引物了,连接不会改变你的阅读框的,关键是在最初设计引物的时候就得考虑好阅读框的问题。
还有一点需要提醒一下,EcoRI这个酶是有Star activity的,一般不可以切太久或者加太多的酶,否则会发生识别位点的错误。
位卑未敢忘忧国。
2楼2008-07-14 01:29:40
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