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weishengwu62新虫 (初入文坛)
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求教“病毒包装”实验技术
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请专家、高手帮帮我。 请教关于“病毒包装”实验的基本程序。可以购到试剂盒吗？ |
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weishengwu62
新虫 (初入文坛)
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- 专业: 病原真菌学
3楼2008-07-13 14:12:13
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http://www.jinsite.com.cn/virus_packaging.html http://www.jingmei.com/site/site/news/e015/e015-06.jsp 不知道对你有用吗？ 慢病毒包装简要程序： 以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×10∧6个293FT细胞。 1、取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清Opti MEM。轻柔混匀，室温孵育5min。 2、取1.5ml灭菌EP管，取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清Opti-MEM I培养基中。轻柔混匀，室温孵育5min。 3、将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min 4、用胰酶消化并记数293FT细胞。用含血清的DMEM培养基重悬细胞。 5、在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合物。 6、将1ml重悬的293FT细胞（1×10∧6个细胞/ml）加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。 7、移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除，代之以DMEM（含丙酮酸钠和非必须氨基酸）。 7、转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。 8、病毒上清-80°C贮存。 包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。 [ Last edited by telomerase on 2008-7-13 at 00:54 ] |
2楼2008-07-13 00:22:50
4楼2008-07-13 21:17:28
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