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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 带有嘌呤霉素的慢病毒侵染问题
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sunrider

禁虫 (小有名气)
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1楼 2015-04-25 23:28:09
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HO-1

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看你的抗嘌呤霉素基因在载体上的位置，如果在两个LTR之间，是总来筛选阳性细胞用的，一般是在病毒感染几天后加入418.

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2015-04-27 14:13:51
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李鹏飞901108

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
嘌呤霉素是真核细胞的筛选标记物，是用来筛选稳转细胞株用的，一般在转染后48-72h加入。
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仰望星空，脚踏实地。
3楼2015-04-27 23:57:19
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)

张斌猪
★
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哺乳动物细胞筛选方法
嘌呤霉素常用浓度范围在1 - 10 μg/ml。等转化出含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的普通培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
1.在转染的48小时内，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
注意：细胞在快速增殖时，抗生素作用最明显。如果细胞浓度过大，抗生素产生的效力也会下降。细胞最好在他们融合率不高于25%时分裂最佳。
2.每隔3-4天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3.筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。
4.转移和放置5-10个抗性克隆到一个35mm的培养皿中，用选择培养基培养7天。这次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
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生命还需要奇迹来衬托
4楼2015-04-28 11:58:24
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男
★
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举个例子：无puro的载体：CMV-MCS-CMV-GFP，有puro的载体：CMV-MCS-CMV-GFP-IRES-PURO
是不是带puro的载体元件更多呀？那么是不是意味着载体更大？
包装病毒，哪一种载体包装出来的滴度更高呢？
不言自明。
如果还不清楚，请联系我。
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我就是我IamwhatIam
5楼2015-07-07 18:10:00
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幽幽深谷竹

金虫 (著名写手)

骨子里是文科男的理科男
不是说载体带puro就一定要在细胞里加嘌呤霉素。这只是代表细胞有这个抗性了，加不加不影响什么。加puro的作用是筛选！
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我就是我IamwhatIam
6楼2015-07-07 18:11:45
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