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炫炎泫

新虫 (初入文坛)

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[求助] 大肠杆菌固体培养基是买现成的还是买牛肉膏蛋白胨等自己配，谢谢~ 已有12人参与

做实验要培养大肠杆菌，我想用大肠杆菌固体培养基，好像没有找到有直接卖成品的，就想的买些其中的成分自己用的时候去配，请问大神这样做对吗

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1楼 2015-04-21 21:00:38

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jiweiweiw

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
炫炎泫: 金币+6, ★★★很有帮助, 谢谢 2015-05-06 10:41:50

LB培养基就可以的。
根据《分子克隆实验指南》（J.萨姆布鲁克D.W.拉塞尔著）配制每升培养基,应该在950 ml去离子水中加入:
胰蛋白胨10g
酵母提取物5g
NaCl 10g
摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌21min.
LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础.
LB培养基的配方如下:
胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化钠(NaCl) 10g/L
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)

固态培养基
LB固体培养基1L和液体一样，加10g~15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。
1.配制：100mlLB培养基加入1~1.5g琼脂粉
2.抗生素的加入：高压灭菌后，将融化的LB固体培养基置于55℃的水浴中，待培养基温度降到55℃时（手可触摸）加入抗生素，以免温度过高导致抗生素失效，并充分摇匀。
3.倒板：一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后，打开盖子，在紫外下照10-15分钟。
4.保存：用封口胶封边，并倒置放于4℃保存，一个月内使用。
ph值需要控制在7.4