| 查看: 952 | 回复: 10 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
三磷酸腺苷铁杆木虫 (职业作家)
|
[交流]
重亚硫酸盐修饰检测DNA甲基化，没辙了……
|
||
|
我用的是重亚硫酸盐修饰后测序法来研究DNA的甲基化情况 将基因组DNA提取出来后（QIAGEN的试剂盒） 测浓度，然后还是用QIAGEN的修饰试剂盒，将1.5ug（于20ul的溶剂）的DNA放进去修饰 修饰完之后，测吸光度，发现剩下0.4ug（20ul溶剂）左右的DNA 但是跑电泳完全没有条带 我还以为是DNA量实在太少所以电泳看不出来 于是拿去PCR 但是35个循环下来，也不见条带 引物设计应该是没问题的，已经考虑到修饰后未甲基化的C变成了U 之前引物是忘记考虑这个因素，拿修饰前的基因组DNA去P，有条带，新设计的引物就考虑了这个因素，但修饰前的基因组DNA还是能P出来。 但修饰后的，无论什么引物都P不出来。 感觉太奇怪 已经在这上头花了一个月的时间，完全不知道哪里出错了。 各位大虾帮帮忙出主意，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
存款400万可以在学校里躺平吗
已经有30人回复
-
拟解决的关键科学问题还要不要写
已经有8人回复
-
最失望的一年
已经有12人回复
-
求推荐英文EI期刊
已经有5人回复
-
请教限项目规定
已经有4人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有20人回复
-
26申博
已经有3人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有10人回复
-
基金申报
已经有6人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
11楼2008-07-08 10:55:33
2楼2008-07-07 02:52:18
3楼2008-07-07 02:53:36
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
|
嗯，谢谢，难怪许多文献都没有提到修饰后去跑电泳 关于引物，其实那些软件也都是将非CG序列的C转换为T，然后按照这个原则来设计引物的。 我用原始序列贴到prime primer 5去设计，然后手动修改了这些区域的碱基。 但其实手动修改的地方不是很多，差不多就在5'有2~3个位点需要改。（我想这么少的错配即使不改也不会有什么问题吧。然后事实证明，无论改还是不改，都能够将修饰前的DNA给扩出来） 然后用这种引物去P没有修饰的DNA也有条带 昨晚又查了些资料，发现有人先用降落PCR做了20个降落循环，然后再用40个循环继续扩增。算起来就60个循环了呢……汗 我打算用这种方法试试 不过得另外去买好一点的酶了，普通Taq酶这么多循环肯定结果都乱七八糟了~ |
4楼2008-07-07 09:11:43