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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)

。。。
11楼2015-04-26 23:01:29
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)

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12楼2015-04-29 21:52:46
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)

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13楼2015-05-05 16:36:31
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)

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14楼2015-05-19 10:31:10
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bingrener

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主两次实验用的是同一批蛋白吗?我觉得楼主很可能是蛋白的问题,如果不是同一批,可能这批的蛋白活力不行,如果是同一批,不知时间相隔多久?有可能是蛋白降解了,活力下降。建议重新纯化蛋白。
15楼2015-06-03 15:53:16
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zhang6871

银虫 (正式写手)

蛋白可能跟探针不结合。
一般固定蛋白浓度,而提高探针浓度,以做竞争实验
过于功利,浮躁,布满灰尘的心都是创新的杀手!多记,心静,多动手,贴近大自然!
16楼2015-06-03 17:56:06
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by bingrener at 2015-06-03 15:53:16
楼主两次实验用的是同一批蛋白吗?我觉得楼主很可能是蛋白的问题,如果不是同一批,可能这批的蛋白活力不行,如果是同一批,不知时间相隔多久?有可能是蛋白降解了,活力下降。建议重新纯化蛋白。

您好,首先谢谢您的应助。我做的这两次用的不是同一批蛋白,是两次纯化出来的,蛋白纯化后我会在15天之内使用,不用时保存在-80度冰箱,感觉不会降解啊。。。
17楼2015-07-06 12:22:12
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
16楼: Originally posted by zhang6871 at 2015-06-03 17:56:06
蛋白可能跟探针不结合。
一般固定蛋白浓度,而提高探针浓度,以做竞争实验

您好,谢谢您的应助。这种方法我倒是没有试过,因为用的探针浓度已经比推荐浓度高很多了,如果再增加,探针可能就没办法被完全消化,并且拍照时可能自由探针带会曝光过度。所以我一般都是固定探针加入量,而梯度改变蛋白浓度,最好能在某一泳道使蛋白与探针完全结合而没有自由探针带。不知您是否尝试过您说的这种方法,对检测是否结合有帮助吗?
18楼2015-07-06 12:28:44
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fificici

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

重新纯化蛋白试试吧  我后来就重新纯化的  效果还可以
19楼2015-07-06 16:33:52
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
19楼: Originally posted by fificici at 2015-07-06 16:33:52
重新纯化蛋白试试吧  我后来就重新纯化的  效果还可以

又纯化过了,还是同样的结果。。。
20楼2015-07-08 22:16:46
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