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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA蛋白浓度梯度升高，探针带有减弱，却看不到蛋白带，求助大家！
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
。。。
11楼2015-04-26 23:01:29
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
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12楼2015-04-29 21:52:46
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
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13楼2015-05-05 16:36:31
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
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14楼2015-05-19 10:31:10
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bingrener

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主两次实验用的是同一批蛋白吗？我觉得楼主很可能是蛋白的问题，如果不是同一批，可能这批的蛋白活力不行，如果是同一批，不知时间相隔多久？有可能是蛋白降解了，活力下降。建议重新纯化蛋白。
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15楼2015-06-03 15:53:16
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zhang6871

银虫 (正式写手)
蛋白可能跟探针不结合。
一般固定蛋白浓度，而提高探针浓度，以做竞争实验
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
16楼2015-06-03 17:56:06
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by bingrener at 2015-06-03 15:53:16
楼主两次实验用的是同一批蛋白吗？我觉得楼主很可能是蛋白的问题，如果不是同一批，可能这批的蛋白活力不行，如果是同一批，不知时间相隔多久？有可能是蛋白降解了，活力下降。建议重新纯化蛋白。

您好，首先谢谢您的应助。我做的这两次用的不是同一批蛋白，是两次纯化出来的，蛋白纯化后我会在15天之内使用，不用时保存在-80度冰箱，感觉不会降解啊。。。
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17楼2015-07-06 12:22:12
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by zhang6871 at 2015-06-03 17:56:06
蛋白可能跟探针不结合。
一般固定蛋白浓度，而提高探针浓度，以做竞争实验

您好，谢谢您的应助。这种方法我倒是没有试过，因为用的探针浓度已经比推荐浓度高很多了，如果再增加，探针可能就没办法被完全消化，并且拍照时可能自由探针带会曝光过度。所以我一般都是固定探针加入量，而梯度改变蛋白浓度，最好能在某一泳道使蛋白与探针完全结合而没有自由探针带。不知您是否尝试过您说的这种方法，对检测是否结合有帮助吗？
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18楼2015-07-06 12:28:44
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fificici

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

重新纯化蛋白试试吧  我后来就重新纯化的  效果还可以
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19楼2015-07-06 16:33:52
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单脚酒杯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by fificici at 2015-07-06 16:33:52
重新纯化蛋白试试吧  我后来就重新纯化的  效果还可以

又纯化过了，还是同样的结果。。。
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20楼2015-07-08 22:16:46
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