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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] 金属蛋白酶的克隆表达能否带His——tag标记?

各位虫虫们好!我们在克隆表达时一般会是目的基因带上His-tag标记,His-tag与亲和柱的金属离子结合以方便纯化。我的目的酶蛋白,在文献上报道,某些二价金属离子的存在可以提高其活性,EDTA则降低其活性,请问如果该酶为金属蛋白酶的话,如果我克隆表达时增加His-tag标记,这是否会破坏本身酶蛋白的活性中心,也就是说His-tag标记与金属离子敖和,使酶失去活性?欢迎大家讨论!
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jasco

木虫 (正式写手)

一方面:一般好象是Zn2+,Mg2+,Ca2+对金属蛋白酶有影响,Ni2+的影响有限吧。另一方面,his tag和金属蛋白酶中的Zn2+,Mg2+反应也不显著,嘿嘿,拙见而已
2楼2008-07-02 17:31:03
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