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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE图求分析
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七小艾

新虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE图求分析 已有6人参与

图中是放线菌菌体破碎上清的SDS-PAGE图，样品最终是用来跑双向的，所以为了减少蛋白降解提高蛋白溶出率，用了不同的细胞裂解方法和几种不同的裂解液，结果如图所示。
A/B/C/D所用裂解液：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail
E:Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail, 8M 尿素
F：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail， 7M尿素，2M硫脲
G：Tris-HCl 50mM pH7.4, protease inhibitor cocktail，2%SDS（终浓度，SDS细胞破碎后加，65℃处理10min）

细胞破碎方法：A涡旋振荡，B超声，CDEFG机械均质

想请教高手几个问题
1、用SDS处理后的样品蛋白胶为什么会跑成这样？上面大分子量的蛋白全没了，下面糊成一片？做过不加SDS进行65℃处理，虽然蛋白有一定程度降解，但大分子量的蛋白条带还是有的，说明不是高温造成的结果。不知道样品中过量的SDS对跑胶有没有什么影响？
2、尿素和硫脲对SDS-PAGE是不是也有影响？因为加了尿素和硫脲的样品蛋白胶颜色反而不如不加的，但是蛋白浓度测定（Bradford法和BCA法都测过）结果显示加了尿素和硫脲的蛋白浓度较高，是不是尿素和硫脲对Bradford法和BCA法都有干扰（硫脲对BCA有干扰是确定的）？
3、蛋白胶每次跑出来下面小分子量部分都没有清晰的条带，而是糊成一片的，这是什么原因？

SDS-PAGE图求分析
IMG_0578_副本.jpg
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1楼 2015-04-07 15:46:54
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七小艾

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by haze12344 at 2015-04-09 10:23:58
我以前用Tris超声破碎后的样品条带都很完整的啊，不过我做的是细胞和大肠杆菌的样品，放线菌没有做过……

之前超声确实有条带丢失，但是最近几次都是完整的，已经搞不清了。。。
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11楼2015-04-20 16:28:54
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bao可雅

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你没有marker吗？marker跑的如何？
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2楼2015-04-08 14:18:52
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七小艾

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bao可雅 at 2015-04-08 14:18:52
你没有marker吗？marker跑的如何？

Marker用完了就没跑，不过以前做的时候Marker是正常的，但是下面小分子量部分也是没有清晰的条带，而是糊成一片的
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-08 16:02:16
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琼琼雨露

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是电泳时间太长，小分子蛋白都跑出去了
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4楼2015-04-08 19:20:50
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