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张曦允

新虫 (小有名气)

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虫号: 2427247
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专业: 环境分析化学

[求助] 请教各位关于测大肠杆菌ROS用dcfh-da~

我最近要测GO负载纳米金属材料后对大肠杆菌ROS的影响~
打算用dcfh-da的方法~用流式测~
但是本人没有生物细胞方面的基础~
所以想请教各位虫友们~具体要怎么操作~有没有相关资料或者视频可以提供参考的~希望能够详细一点的，具体一点的~
我最近也看了很多用dcfh-da测ROS的帖子~对于是先负载探针还是先加材料刺激还是不能确定~我的材料与细胞的接触时间在两个小时以内~
我养大肠杆菌一般是做锥形瓶中培养18-24h，那么是直接用枪头取一定体积的菌液吗？还是稀释一下?然后具体怎么操作还是比较迷茫~是直接加入dcfh-da然后再加材料吗？中间的间隔时间有什么要求嘛？
关于放入培养箱培养，就用培养大肠杆菌的培养箱可以嘛？（37摄氏度，要一直震荡还是隔三五分钟手动震荡）
然后离心，离心之后，我看不同的帖子，有的写弃上清液，有说不要弃上清液，好迷茫，怎么也是对的？稳PBS洗三次~
然后1ml离心水洗后的液体上机嘛？

对于ROS是种通透性物质，可以穿过细胞膜，那么测的时候如何区别是胞内产生的还是胞内产生之后穿过细胞膜产生的荧光?

麻烦对我上面描述的过程给出指导，如果哪里写的不对或有错误的地方也请指教~

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