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[交流]
枯草芽孢杆菌转化
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各位虫友好！！ 我实验是准备把连接上的基因序列转入枯草芽孢杆菌宿主DB104中，用常规的方法，就是采用EGTA鳌合的方法，有什么地方要注意的吗？？ 急！！！！！！！ |
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zbjshg
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3楼2008-06-30 10:19:14
lybio
金虫 (正式写手)
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2楼2008-06-29 23:33:58
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lixiaoyi1981(金币+3,VIP+0):如果以后能编辑一下就好了，这样看起来有点累哦，谢谢
lixiaoyi1981(金币+3,VIP+0):如果以后能编辑一下就好了，这样看起来有点累哦，谢谢
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枯草杆菌化学感受态制备及转化方法 试剂 枯草杆菌化学感受态制备及转化方法 l 试剂 SPI－I Salts Solution：（500g Solution） 0.4％ (NH4)2SO4 0.2g 2.8% K2HPO4·3H2O 1.4g 1.2% KH2PO4 0.6g 0.2% Trisodium Citrate Dihydrate 0.1g 121℃灭菌20min SPI－II Salts Solution：（500g Solution） 0.04% MgSO4·7H2O 0.02g 121℃灭菌20min 100× CAYE Solution：（100g Solution） 2％ Casamino acid 2g 10％ Yeast Extract 10g 121℃灭菌20min SPI Medium：（20mL） 9.8mL SPI－I Salts Solution 9.8mL SPI－II Salts Solution 200µL （1％V）Glucose（50％W，115℃灭菌20min） 200µL （1％V）100× CAYE SPII Medium：（6mL） 5.88mL SPI Medium 60µL （1％V）50mM CaCl2 60µL （1％V）250mM MgCl2 100×EGTA Solution：10mmol／L EGTA 溶液，溶解时需加少量NaOH至pH8.0 l 工具：（以下物品均需灭菌） 50mL离心管，1.5mL离心管，5mL枪头，1mL枪头 ，200µL枪头，20µL枪头，空的10mL试管，纱布，涂布棒 l 方法 1、 前一天晚上挑取宿主菌接种于3mL 液体培养基中，37℃摇床培养过夜。 2、 第二天早上从过夜培养物中取100µL菌液，接种至用50mL 离心管配好的5mL SPI Medium中，37℃摇床培养，3hr后开始测OD 600，当培养物生长到对数末期时约4.5小时，快速取200µL接种到2mL SPII Medium中，于37℃100rpm摇床培养1.5hr。 3、 加20µL 100×EGTA溶液，于37℃100rpm摇床培养10min，用1.5mL离心管分装成500µL每管。 4、 向管中加入适量的质粒，轻轻混匀于37℃100rpm摇床培养30min。 5、 将离心管转移到250rpm摇床，37℃培养1.5hr。 6、 以4000rpm离心收集菌体，弃部分上清液，留100µL重悬菌体，涂相应的选择性平板，37℃过夜培养。 |
4楼2008-06-30 19:58:31
5楼2008-06-30 20:15:22
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