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fuyangQU

银虫 (小有名气)

[求助] Abeta42 溶解问题 已有1人参与

大家好,我的Amyloid beta 42 总是溶解不好。处理步骤是Abeta42冻干的1mg粉末先用1ml六氟异丙醇溶解后,37度摇床过夜,浓度1mg/ml, 取36uL 含有Abeta42的六氟异丙醇溶液于1.5ml的离心管中,然后用氮气吹干,再加入5uL DMSO助溶,最后加入400uL三次水溶解, 终浓度20uM。但是这样处理后,溶液中有不溶解的小颗粒,溶液离心后,在离心管的底部有不溶物。大家有什么好的处理步骤吗?请不吝赐教啊!!!!
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坚持,就是胜利
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mataomatao

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2015-03-12 11:07:27
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mataomatao

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

3楼2015-03-12 11:09:05
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mataomatao

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
fuyangQU: 金币+80, ★★★很有帮助, 我再看看还有回复的没,不全给你了 2015-03-13 16:54:38
本帖内容被屏蔽

4楼2015-03-13 13:49:14
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ajshen

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mataomatao at 2015-03-13 13:49:14
已发文献,希望同学认真尝试;如有问题请与我联系。100个金币想想都醉了

文献能顺便给我不?我可以也给你100个金币
JESSICA
5楼2015-10-12 21:46:09
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ajshen

木虫 (小有名气)

文献是否可以分享一下,我可以回赠你一些金币
JESSICA
6楼2015-10-13 10:48:42
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yls10

木虫 (著名写手)

楼主,我也有类似的溶解不好的问题,您现在这个问题解决了吗?有没有好的参考资料,求指导!多谢,我会把金币100奉上!
得失随缘,不增不减。
7楼2016-03-10 09:38:47
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fuyangQU

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yls10 at 2016-03-10 09:38:47
楼主,我也有类似的溶解不好的问题,您现在这个问题解决了吗?有没有好的参考资料,求指导!多谢,我会把金币100奉上!

你好,基本上算是解决了,先加点DMSO助溶,涡旋,等看到基本溶解了,再加氢氧化钠(PH=11~13),再加PBS缓冲到7.4,氢氧化钠和PBS的比例我的实验结果是这样的你可以参考,但是也自己验证一下:
NAOH PH=12时,由PBS稀释20倍时,混合液PH=7.2
                          由PBS稀释10倍时,混合液PH=7.4
                          由PBS稀释5倍时,混合液PH=7.6
NAOH PH=13时,可以按照上面换算
另外强酸碱会水解Abeta,最好在碱液里不要存放过长时间,稀释完成后可以打质谱或者跑胶看看分子有没有被破坏。希望可以帮助你。
坚持,就是胜利
8楼2016-03-11 09:46:46
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yls10

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by fuyangQU at 2016-03-11 09:46:46
你好,基本上算是解决了,先加点DMSO助溶,涡旋,等看到基本溶解了,再加氢氧化钠(PH=11~13),再加PBS缓冲到7.4,氢氧化钠和PBS的比例我的实验结果是这样的你可以参考,但是也自己验证一下:
NAOH PH=12时,由P ...

为什么要加NaOH?新手不懂,望指教,多谢~
得失随缘,不增不减。
9楼2016-03-15 12:37:57
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fuyangQU

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by yls10 at 2016-03-15 12:37:57
为什么要加NaOH?新手不懂,望指教,多谢~...

不是生物专业的,没学过生化,但是肯定是破坏了稳定多肽结构的分子间力,分子间力无非是氢键,疏水作用,盐键,范德华力几种,我也说不清楚就不误导你了。
坚持,就是胜利
10楼2016-03-15 18:55:27
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