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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Abeta42 溶解问题
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fuyangQU

银虫 (小有名气)

[求助] Abeta42 溶解问题 已有1人参与

大家好，我的Amyloid beta 42 总是溶解不好。处理步骤是Abeta42冻干的1mg粉末先用1ml六氟异丙醇溶解后，37度摇床过夜，浓度1mg/ml, 取36uL 含有Abeta42的六氟异丙醇溶液于1.5ml的离心管中，然后用氮气吹干，再加入5uL DMSO助溶，最后加入400uL三次水溶解, 终浓度20uM。但是这样处理后，溶液中有不溶解的小颗粒，溶液离心后，在离心管的底部有不溶物。大家有什么好的处理步骤吗？请不吝赐教啊！！！！
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坚持，就是胜利
1楼 2015-03-10 12:47:28
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2015-03-12 11:07:27
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2015-03-12 11:09:05
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
fuyangQU: 金币+80, ★★★很有帮助, 我再看看还有回复的没，不全给你了 2015-03-13 16:54:38
本帖内容被屏蔽
4楼2015-03-13 13:49:14
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ajshen

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mataomatao at 2015-03-13 13:49:14
已发文献，希望同学认真尝试；如有问题请与我联系。100个金币想想都醉了

文献能顺便给我不？我可以也给你100个金币
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JESSICA
5楼2015-10-12 21:46:09
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ajshen

木虫 (小有名气)
文献是否可以分享一下，我可以回赠你一些金币
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JESSICA
6楼2015-10-13 10:48:42
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yls10

木虫 (著名写手)
楼主，我也有类似的溶解不好的问题，您现在这个问题解决了吗？有没有好的参考资料，求指导！多谢，我会把金币100奉上！
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得失随缘，不增不减。
7楼2016-03-10 09:38:47
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fuyangQU

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yls10 at 2016-03-10 09:38:47
楼主，我也有类似的溶解不好的问题，您现在这个问题解决了吗？有没有好的参考资料，求指导！多谢，我会把金币100奉上！

你好，基本上算是解决了，先加点DMSO助溶，涡旋，等看到基本溶解了，再加氢氧化钠（PH=11~13），再加PBS缓冲到7.4，氢氧化钠和PBS的比例我的实验结果是这样的你可以参考，但是也自己验证一下：
NAOH PH=12时，由PBS稀释20倍时，混合液PH=7.2
                          由PBS稀释10倍时，混合液PH=7.4
                          由PBS稀释5倍时，混合液PH=7.6
NAOH PH=13时，可以按照上面换算
另外强酸碱会水解Abeta，最好在碱液里不要存放过长时间，稀释完成后可以打质谱或者跑胶看看分子有没有被破坏。希望可以帮助你。
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坚持，就是胜利
8楼2016-03-11 09:46:46
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yls10

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by fuyangQU at 2016-03-11 09:46:46
你好，基本上算是解决了，先加点DMSO助溶，涡旋，等看到基本溶解了，再加氢氧化钠（PH=11~13），再加PBS缓冲到7.4，氢氧化钠和PBS的比例我的实验结果是这样的你可以参考，但是也自己验证一下：
NAOH PH=12时，由P ...

为什么要加NaOH?新手不懂，望指教，多谢~
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得失随缘，不增不减。
9楼2016-03-15 12:37:57
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fuyangQU

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yls10 at 2016-03-15 12:37:57
为什么要加NaOH?新手不懂，望指教，多谢~...

不是生物专业的，没学过生化，但是肯定是破坏了稳定多肽结构的分子间力，分子间力无非是氢键，疏水作用，盐键，范德华力几种，我也说不清楚就不误导你了。
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坚持，就是胜利
10楼2016-03-15 18:55:27
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