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新虫 (小有名气)

[交流] 原代细胞贴

原代细胞如何纯化？
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1楼 2015-03-09 09:57:30
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limi的猜想

新虫 (初入文坛)
1、预先高压消毒所需要的器材
2、取完新鲜组织后要用冰冷充分洗涤洗掉杂细胞，分离也要尽量挑除血管等。不过也不要搞太久，否则分出来的细胞活力很差
3、胶原酶比胰酶更适合消化组织，消化时间和强度就要自己摸索
4、建议在胶原酶快消化结束之前加DNase I，这样细胞会更加分散，过筛子的时候更好过，分出来的细胞量更大
5、种板两天之内不要去碰他，加1.5~2倍双抗养着，两天后第一次换液的时候小心点，慢慢摇晃摇掉杂细胞。后续的换液也同样操作，视情况可以冲洗
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2楼2015-03-09 10:07:30
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昵称最头疼

新虫 (初入文坛)
度娘啊，或者直接问问专业的原代细胞培养公司，嘿嘿！
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3楼2015-03-09 10:10:58
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luoye2015

新虫 (初入文坛)
原代细胞纯化的方法有多种，不同细胞有不同方法，下面列举几个，看什么方法适合你，希望对你有所帮助：
（1）酶消化法
在消化培养细胞时，常是成纤维细胞先脱壁，而上皮细胞要消化相当长的时间才脱壁，特别是在原代培养和培养早期这种差别尤为明显，因而可以利用这种差异采用多次差别消化方法将上皮细胞和成纤维细胞分开。
（2）机械划除法
原代培养成功后，上皮细胞和成纤维细胞多数都同时出现，混杂生长。这种混杂生长常常分区成片，每种细胞都以小片或区域性分布的方式生长在瓶壁上。因此可以采用机械的方法去除不需要的细胞。
（3）反复贴壁法
成纤维细胞与上皮细胞相比，其贴壁过程快，大部分细胞常能在短时间内大约10－30min完成附着过程，而上皮细胞大部分在短时间内不能附着或附着不稳定，稍加振荡即浮起，这样可以利用此差别来纯化细胞。
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4楼2015-03-09 10:15:40
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