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lufuhao

木虫 (著名写手)

极品木虫

[交流] SDS-PAGE电泳条带不清晰是怎么回事

高手指教:
     我做SDS-PAGE,5%浓缩胶,10%分离胶。
     样品取4ul  +  6ul ddH2O  +  10ul loading buffer(2*),煮沸5min,12000r/min*3min,取10ul上样电泳
     浓缩胶部分用10mA电流,分离胶部分用15,染色1.5h,脱色至胶无底色

     这样下来发现条带不是很清晰,看着有点模糊,但是样子还过得去。求教老手,这是怎么回事?明天我拍个照船上来看看
  
     跑胶的时候是稳流,如果稳压,电压分别取多少?我跑了很多次,都是这样!
[search]SDS-PAGE;不清晰[/search]

[ Last edited by lufuhao on 2008-6-26 at 08:36 ]
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将心比心
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gnice

金虫 (正式写手)

分离胶加大到12% 试试
2楼2008-06-19 21:02:54
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hqhe

木虫 (正式写手)

楼上的回复是可行的,加大分离胶的浓度,如果加大到15%都依然如此,则很有可能你的试剂或者样品制备有问题,还有就是电压不能过低,否则条带会虚
3楼2008-06-19 21:40:19
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sdnubb

铜虫 (初入文坛)

也会有可能是蛋白样品出问题了哦
4楼2008-06-20 14:19:12
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seahow

木虫 (著名写手)

没看到你的图,另外你是稳流吗? 你可以稳压,60~140V都可以,电流一般小于40mA。电流发热的,。
离心8000rpm足矣,为的是去除不溶的。
5楼2008-06-20 14:26:39
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connexin

金虫 (小有名气)

脱色时间不要过长
6楼2008-06-21 08:26:12
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