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ivor0123

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8楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-03-08 20:08:05
先转克隆菌株啊，BL21提质粒效果好吗？
...

目的基因是连在克隆载体上的，但是现在的目的是将克隆载体上的目的基因替换掉表达载体上的同源基因。这个应该跟BL21没有太大关系吧？

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人生究竟是喜剧还是悲剧，并不取决于你生活的状态，而是取决于你看待自己人生的态度。

11楼2015-03-08 21:24:52

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9楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-03-08 20:09:53
长得时间太长了，或者抗性失效了，反正我之前也会出现这样的情况，后来果断就放弃了，重新酶连转化
...

如果抗性失效的话，平皿上应该能长很多菌啊。现在的情况是一块平皿上长了五个大菌落，周围长了很多小菌落。照理来说，长卫星菌落应该不影响中间的大菌落的吧？

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12楼2015-03-08 21:27:45

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7楼: Originally posted by 力攻 at 2015-03-08 18:34:22
确定从开始的酶切到后面连接浓度都够吗？整套流程下来计算浓度是否按照摩尔浓度？

请问下，这个摩尔浓度要怎么计算啊？我们已经做连接做了好多次了，一直不成功，增加质粒浓度跟延长酶切时间都试过了，就是不长，难得长了，还没法用液体培养基培养出来，求赐教啊

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13楼2015-03-08 21:30:01

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12楼: Originally posted by ivor0123 at 2015-03-08 21:27:45
如果抗性失效的话，平皿上应该能长很多菌啊。现在的情况是一块平皿上长了五个大菌落，周围长了很多小菌落。照理来说，长卫星菌落应该不影响中间的大菌落的吧？...

长了多长时间？

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天道酬勤

14楼2015-03-08 21:40:43

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力攻

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13楼: Originally posted by ivor0123 at 2015-03-08 21:30:01
请问下，这个摩尔浓度要怎么计算啊？我们已经做连接做了好多次了，一直不成功，增加质粒浓度跟延长酶切时间都试过了，就是不长，难得长了，还没法用液体培养基培养出来，求赐教啊...

你可以找度娘，很容易找的。
整个流程再看看，从PCR开始，总之浓度都要高

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15楼2015-03-09 20:54:48

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