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yunzecp

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】酵母双杂交试验细节

本人主要做的是有机酸代谢方面的研究,尤其是柠檬酸代谢途径中的几种酶类,因此想用酵母双杂交技术钓一下相互作用的蛋白,但有几点疑虑,望高手指点:
1.柠檬酸循环是在线粒体中完成的,而酵母双杂交的要求是核蛋白
2.柠檬酸循环是提供能量代谢的主要途径,酵母中应该也有,但它肯定在线粒体中,会不会产生假阳性
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yunzecp

新虫 (初入文坛)

【求助】酵母双杂交试验细节

本人主要做的是有机酸代谢方面的研究,尤其是柠檬酸代谢途径中的几种酶类,因此想用酵母双杂交技术钓一下相互作用的蛋白,但有几点疑虑,望高手指点:
1.柠檬酸循环是在线粒体中完成的,而酵母双杂交的要求是核蛋白
2.柠檬酸循环是提供能量代谢的主要途径,酵母中应该也有,但它肯定在线粒体中,会不会产生假阳性Sample Text
2楼2008-06-17 15:59:04
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haiven

捐助贵宾 (著名写手)

假阳性是Y2H的一大弊病,但是,从理论上分析,你所需要研究的相互作用的靶标完全是可以在细胞质中发生相互作用,而且,以一个trait 去筛选一个文库,肯定有很多的candidates, 所以最后你还要用pull-down等技术去验证相互作用的可靠性,以最大限度的排除假阳性。。。
走进你,温暖我,迷失于这个世界!
3楼2008-06-17 18:43:02
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yunzecp

新虫 (初入文坛)

谢谢 haiven  指点,
4楼2008-06-23 14:37:40
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cmtoon

木虫 (正式写手)


本人也是做蛋白质相互作用的,对于你的第一个问题,我觉得你确实需要考虑一下,酵母双杂交用来检测线粒体中蛋白的相互作用可能会不成功。个人建议你利用串联亲和纯化或者PULL DOWN的方法试试。
5楼2008-06-23 14:48:29
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