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chenying7459

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA 的纯化

2.3.2 DNA 的纯化
(1)加入 450μlTE 溶液于上述备用 DNA(50ul) 溶液中,充分混匀,加入等
体积酚:氯仿:异戊醇溶液(25:24:1),轻轻上下颠倒;
(2)10000 转/分离心 8 分钟,吸取上清于另一 EP 管中,加等体积
酚:氯仿:异戊醇溶液,抽提一次;
(3)如果上清液仍不澄清,重复(2)一次;
(4)加入 0.2 倍体积 3mol/L 醋酸钠溶液(PH=5.2)和 2 倍体积冷无水
乙醇,小心混匀后,10000 转/分离心 5 分钟,弃上清;


各位大神,在上述步骤中---10000 转/分离心 8 分钟,吸取上清于另一 EP 管中,加等体积酚:氯仿:异戊醇溶液,抽提一次----这句话中吸取上清置另一EP中,上清是要还是丢弃啊?就是DNA是在上清中还是在沉淀里啊?这个等体积是多少啊?500还是1000啊?0.2倍体积是多少啊?不懂。
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
chenying7459: 金币+10, 博学EPI+1 2015-01-29 07:18:17
DNA在上清。。纯化是要蛋白质变性沉淀。
等体积取决于你吸取上清多少,例如你就吸了100ul上清,那你等体积就是100ul。
0.2倍体积,同理,乘以上面你吸的体积。。。。
2楼2015-01-28 14:42:53
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