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雨无论次

银虫 (小有名气)

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专业: 植物遗传学

[交流] 大家用农杆菌做转基因实具体都用的什么方法啊，效果怎样？？先爆料我的，

无菌苗的获得
棉花种子去壳后，75%酒精灭菌1min，0.1%HgCl2（升汞）灭菌15min，无菌水冲洗8-10遍，至于摇床上催芽萌发，种子露白后接种于MSB固体培养基，28℃暗培养2-3d。
萌发培养基：
MSB母液+蔗糖20g/L+普通琼脂6-7g/L，pH6-8.
棉花茎尖遗传转化
切生长点至其下部5cm，备用
菌液OD值一般0.8均可。
转化步骤：
1、吸取菌液10ml平均分到10个灭菌的1.5ml离心管中，10000rpm，1min；
2、倒掉上清液，每管沉淀中加入1ml液体共培养液；
3、吹打混匀，将液体倒入无菌三角瓶中，置于摇床备用；
4、切好茎尖后（划伤生长点），将其放入步骤3的液体中，并加入10ulAS，有助于侵染；
5、然后将三角瓶放于摇床，侵染20min；
6、侵染结束后，将下胚放入共培养基上暗培养2d
然后筛选，生根，。————我做了一阵子了，到目前为止还没有获得阳性苗，大家都用的什么方法呢？求交流与指点

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