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changbao

木虫 (初入文坛)

[交流] 求助:酶切完后怎么出现了4条带呀

各位虫友:
    你们好!现在本人有一个问题求助,我做酶切鉴定时,本来目的基因是1000bp,载体pET28是5300,酶切完后怎么出现了4条带呀,在5300和1000有带,在2000bp左右有两条带,带不是很亮,大家帮我分析一下,谢谢各位虫友了!我用的感受态细胞是BL21.
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humants

金虫 (正式写手)

你的酶切位点是什么,你看一下会不会有多个切点!
2楼2008-06-05 11:08:14
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xiukuncui

木虫 (正式写手)

你可以同时再分别切一下你的空质粒与目的片段,就知道原因了
3楼2008-06-05 11:11:25
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hulqi

金虫 (正式写手)

找卖给你质粒的公司要质粒图谱,看具体的酶切位点分布,或者直接对空质粒和PCR产物切割,跑电泳对比就知道了……
4楼2008-06-05 17:12:32
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lingyu20071001

银虫 (小有名气)

有没有可能是质粒浓度太大,部分没有完全切开的问题
5楼2008-06-06 13:11:12
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

是不是出现了星号活性?

建议把你所用的酶列出来

有可能是由于buffer的原因
____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
6楼2008-06-06 13:16:53
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changbao

木虫 (初入文坛)

谢谢各位虫友给我提的建议!
7楼2008-06-06 16:47:30
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