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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 提取总RNA后，反转录在PCR扩增，条带大小不符合要求？
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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 名白纸号白纸 at 2015-01-22 09:58:14
结果都是无从下手啊。。...

好吧，一起努力吧

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11楼2015-01-22 17:17:38
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
如果你的序列已经报道过了，就500bp嘛，测个序看看，是完全p到了其他条带，还是只p到了一部分。然后就是cDNA要提的好，pcr的酶可以换换，才1kb而已，应该没有问题的。

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12楼2015-01-22 17:56:32
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
名白纸号白纸: 金币+6, ★有帮助 2015-01-23 16:50:41
首先确定胶的质量，其次确定marker显示的是否是对的。这两者没有问题在考虑下面的因素。
楼主可以上个图来看看你=，比较直观一点。
如果500bp的那个确实不是你想要的产物的话，说明你的产物完全没有扩增出来，所以，先确定模板有没有降解（没有模板，扩增出来的当然只有引物二聚体啊），第二，引物的设计是否合理，最后考虑你的酶（普通Taq酶活是热启动聚合酶），一一分析，得出结论
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
13楼2015-01-23 10:31:29
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信心百倍1234

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

要么测序看一下，要么重新设计引物，不过还不知道你扩片段的目的是什么？
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14楼2015-03-22 11:00:00
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

前提：确定marker是正确的
然扩增出来的是500bp的话，是不是引物二聚体呢？1000bp的条带还是比较容易P的，看看你的引物合理性怎样，可以发一下图片的，更直观准确一点，也有可能是所用的试剂不合理，可以进行条件摸索，温度时间浓度，酶的选择，你这个实验一般的热启动聚合酶就可以了，其他的可能会适得其反
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
15楼2015-03-23 10:04:00
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