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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 名白纸号白纸 at 2015-01-22 09:58:14
结果都是无从下手啊。。...

好吧,一起努力吧

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2015-01-22 17:17:38
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

如果你的序列已经报道过了,就500bp嘛,测个序看看,是完全p到了其他条带,还是只p到了一部分。然后就是cDNA要提的好,pcr的酶可以换换,才1kb而已,应该没有问题的。

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2015-01-22 17:56:32
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
名白纸号白纸: 金币+6, 有帮助 2015-01-23 16:50:41
首先确定胶的质量,其次确定marker显示的是否是对的。这两者没有问题在考虑下面的因素。
楼主可以上个图来看看你=,比较直观一点。
如果500bp的那个确实不是你想要的产物的话,说明你的产物完全没有扩增出来,所以,先确定模板有没有降解(没有模板,扩增出来的当然只有引物二聚体啊),第二,引物的设计是否合理,最后考虑你的酶(普通Taq酶活是热启动聚合酶),一一分析,得出结论
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
13楼2015-01-23 10:31:29
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信心百倍1234

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

要么测序看一下,要么重新设计引物,不过还不知道你扩片段的目的是什么?
14楼2015-03-22 11:00:00
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

前提:确定marker是正确的
然扩增出来的是500bp的话,是不是引物二聚体呢?1000bp的条带还是比较容易P的,看看你的引物合理性怎样,可以发一下图片的,更直观准确一点,也有可能是所用的试剂不合理,可以进行条件摸索,温度时间浓度,酶的选择,你这个实验一般的热启动聚合酶就可以了,其他的可能会适得其反
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
15楼2015-03-23 10:04:00
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