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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 5"race 技术识别转录起始位点的原理是什么？
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绿筱一夏

新虫 (初入文坛)

[求助] 5"race 技术识别转录起始位点的原理是什么？ 已有2人参与

5‘race 为什么可以确定转录起始位点？
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1楼 2015-01-19 22:11:34
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:17:18
就是引物批出来片段连t载测序进行验证
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2楼2015-01-20 08:39:06
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:17:25
为什么要做5'race呢，就是cDNA缺少5'信息，找不到合适的引物，所以拉不到全长，5'race就是要在5‘端尽头找一个引物，通过pcr就能知道全部序列信息了，这个引物怎么找呢，有很多方法，现在常用的就是在5’端（其实是cDNA 3'）加poly t，加完了以后用oligo A引物来拉出片段，因为t是加在5'尽头的，所以5'的序列信息都可以知道，起始知道的是cDNA3'的序列，如果反转录那一步跑到头了，那cDNA3‘就可以反应mRNA5'的信息，就是所谓的转录起始位点了，但反转录能不能跑到头是个问题，因此“5’race 技术识别转录起始位点”这句话是要打折扣的
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3楼2015-01-20 10:30:31
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绿筱一夏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-20 10:30:31
为什么要做5'race呢，就是cDNA缺少5'信息，找不到合适的引物，所以拉不到全长，5'race就是要在5‘端尽头找一个引物，通过pcr就能知道全部序列信息了，这个引物怎么找呢，有很多方法，现在常用的就是在5’端（其实是 ...

CDNA为什么会缺少5‘信息呢，我做的是原核生物，他的mRNA 也不会被加帽加尾啊
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4楼2015-01-20 12:43:49
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
绿筱一夏: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-01-24 10:28:58
引用回帖:
4楼: Originally posted by 绿筱一夏 at 2015-01-20 12:43:49
CDNA为什么会缺少5‘信息呢，我做的是原核生物，他的mRNA 也不会被加帽加尾啊...

我的意思是5‘端的信息我们不知道，是我们的认知里面缺少5'端信息，所以才要人工加尾。如果是原核你还可以省了去帽这一步，直接加tdt或接头。
我后面说的5’端不一定跑到头到是有可能损失一部分序列信息，可以去查反转录酶的说明书，都不保证能延伸到头。
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5楼2015-01-20 15:40:42
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