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克拉克肯特至尊木虫 (著名写手)
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Tryptic soy agar plates are made containing a diluted overnight culture of a reporter strain, the appropriate antibiotic to maintain the reporter, and X-GAL (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-galactopyranoside) as a reagent to detect β-galactosidase activity.Following incubation, the plates containing hla::lacZ will become intensely blue due to high hla expression and thus production of β-galactosidase enzyme, while plates with spa::lacZ will become very light blue. spa基因和hla基因和蓝白筛选有什么关系呢  fmicb-05-00706-g003.jpg |
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至尊木虫 (知名作家)
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【答案】应助回帖
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克拉克肯特: 金币+15, 翻译EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-01-19 09:03:45
克拉克肯特: 金币+15, 翻译EPI+1, ★★★★★最佳答案 2015-01-19 09:03:45
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这是一个检测系统，用于筛选某些QSI抑制物。其实这两句话本身是很容易的，我估计你对这个系统不了解，所以可能不知道作者在说什么。所以我就不翻译了，只要是用我自己的话给你解释一下这个系统就可以了。 背景：hla和spa都是细菌（这里是金葡菌）的表达产物，而且在细菌的不同生长介导表达水平是不同的：spa在细菌繁殖时高表达，而hla则在细菌静息是高表达，人们也在试图利用这个特定去寻找抗菌的办法。 筛选系统：目的是寻找对hla和spa的表达具有调节作用的物质某些物质（这里是小分子物质）。要实现这一目的，必需有一个方便、便于检测的系统。因为虽然可以直接检测细菌内源性hla和spa的表达水平，但无法用于大规模（如高通量）筛选。为了解决这一问题，所以就建立了这一检测系统。在该系统中，首先是构建可以表达融合蛋白的表达载体，这里就是文中提及的hla::lacZ和spa::lacZ。其中前者（hla::lacZ）表达产物是α-毒素与β-gal的融合蛋白，后者则为蛋白A与β-gal的融合蛋白。如果对这一技术不了解，那我在用更通俗的话说一下：就是将这两个载体导入细菌后，就可以表达出上述两种融合蛋白。为什么要融合蛋白？便于检测！就是说，只要在培养细菌时向培养基内加入X-GAL，那么X-GAL就可以与含有β-gal的融合蛋白反应，产物引起培养基颜色的变化，而且颜色变化的程度反映了融合蛋白表达水平的高低。在本例中，hla融合基因的表达水平很高，所以蓝颜色非常深，而spa融合基因表达水平相对较低，故而呈浅蓝色。 在具体筛选时，如果加入的小分子物质对hla:lacZ的表达有明显抑制作用，则该融合基因的表达产物明显减少，所以颜色由深蓝明显变浅，甚至干脆变为无色或白色；类似的，如果小分子物质对spa:LacZ的表达具有明显促进作用，则颜色也由浅明显变深。话剧话说，通过观察培养基颜色的变化就可以判断所筛选的小分子物质是否对该基因的表达有调节作用。 不知道你明白了没有，慢慢折磨一下吧。 |
2楼2015-01-19 04:30:40
