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lybio金虫 (正式写手)
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选择性标记基因的表达
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常见的选择性标记基因主要有3类：第1类为药物抗性标记基因，第2类为营养缺陷型标记基因，第3类为功能标记基因。 实验有关基因敲除方面，就是在目的基因中插入选择标记基因，致使目的基因失活，通过选择标志筛选转化子。想问的问题是： A、对于第1类在载体上的抗性基因，比如在它的上游插入某个基因片段，下游也插入某个基因片段，要使它能在真菌中表达，是不是要保证上游插入的碱基数不影响它的阅读框架？ B、对于第2类营养缺陷型标记基因，一方面，与A同样的问题；另一方面，它是不是可以不管上游碱基多少个，只要有标记基因，它就能与缺陷型菌同源重组，就能正常表达，使受体细胞表现野生型生长？ |
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playboy723
金虫 (正式写手)
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reasonspare(金币+5,VIP+0):thx
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应该是所有的表型都是通过蛋白的表达来实现的 比如氨苄青霉素的抗性表达就是通过表达b内酰胺酶来实现的 所以理论上对载体的任何改建最好不要破坏载体原有的氨基酸编码序列 无论你是插入还是删除 插入时要注意 ：如果想要插入片段后的片段表达的话 那插入片段中就不能有终止密码子 否则将造成提前终止 当然如果你在无关位置插入的话要自带启动子的 B的问题理论上也是如此的 所以你得确保标记基因的正确表达 另外如果插入的片段太大的话再加上标记基因那整个编码区太大 会造成表达能力的下降 这又涉及到一个条件优化的问题 如果片段太大的话最好是自带启动子 而不要和标记基因共用一个启动子 当然又一个问题是你的载体对于外源基因大小的容忍程度了 |
2楼2008-08-19 15:32:40