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clf0803

银虫 (正式写手)

[交流] PCR温度不稳定,如何筛选阳性克隆?

各位高手,我现在遇到比较麻烦的问题,以前PCR一直很稳定由于中间有个阶段没有做之后,PCR一直不稳定,能做出来,但每次做梯度出带的温度都不一样,这也给我现在筛选阳性克隆带来了大问题,不知如何筛选?这该怎么解决?急!
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bbcaaa888

铁虫 (小有名气)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
那你可以把不稳定的原因找出来,比如试剂、taq酶,引物是不是出了问题,是否长菌了、失效了?如果你用的是国产taq酶,那很可能是taq酶出了问题,换taq酶试试;
2楼2008-07-12 11:49:07
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seahow

木虫 (著名写手)


xyklmu(金币+1,VIP+0):感谢答复
退火温度低一点就可以了,
3楼2008-07-12 20:38:16
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
一试剂是不是和原来用的一样 包括酶 引物等
二pcr仪器是不是用的同一台
三模板克隆是不是正确 是不是就不是阳性克隆
4楼2008-07-30 20:00:52
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xipha

木虫 (正式写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
建议降落PCR,就是开始五个循环,从最高退火温度起每个的退火温度降1-2度,然后30循环低退火温度
5楼2008-08-30 22:59:45
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