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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » EasyTaq酶能P出条带而用LATaq酶却只有弥散性条带
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xiangqin90

新虫 (初入文坛)

[求助] EasyTaq酶能P出条带而用LATaq酶却只有弥散性条带 已有2人参与

EasyTaq酶能P出条带而用LATaq酶却只有弥散性条带，求大神指点！
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想要做的更好
1楼 2015-01-07 14:12:22
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781055707

木虫 (著名写手)
那个条带好就用那个呗，DNA聚合酶效率不一样很正常呀。
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-01-07 15:19:41
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倩倩的千千结

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:38:45
easytaq酶的扩增效率比较高，但是错配的概率会偏高。LaTaq是专门扩增长片段的，保真效果比较好的酶，但是扩增效率稍差，如果你的片段不是特别长，可以用probest酶PCR试试。
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3楼2015-01-07 16:01:25
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xiangqin90

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 倩倩的千千结 at 2015-01-07 16:01:25
easytaq酶的扩增效率比较高，但是错配的概率会偏高。LaTaq是专门扩增长片段的，保真效果比较好的酶，但是扩增效率稍差，如果你的片段不是特别长，可以用probest酶PCR试试。

昨天刚用这两种酶重新P了一下，之前能P出条带的EasyTaq酶也P出的是弥散性条带，求解？
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想要做的更好
4楼2015-01-09 09:32:56
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
弥散性的原因，可能是跑胶过程中电压不稳，或者是和胶浓度退火温度有关。
还有一个原因是非特异性产物多，造成弥散。如果是这样的话，换成是热启动Taq酶较好，LA的话小于10kb的条带不要考虑使用（因为可能起到反作用，呵呵），普通酶也不建议使用，没有保障，想来想去，还是热启动Taq酶较为合适，便宜又能达到效果，http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
5楼2015-01-09 11:45:21
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