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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 凝胶回收问题
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hotdunk

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
你都做了胶回收了回收的产物还要再检测一次干什么呢？回收前条带很亮说明量多，那也就在那100mg的胶里，你加了400ul溶胶液，最后离干净了用20*2ul Elution Buffer洗脱，这个体系本来就有损失，还能剩多少？你把最后的回收产物再醇沉了重溶跑跑看，肯定都没第一次切胶前的亮度高~ 回收完就直接连接什么的了，没必要检测~ 连不上了再回来检测怀疑这里的毛病也不晚~

PS：10000rpm无所谓，我13000也没失败过。不过那个65度十分钟没啥必要，目测一下溶了就行，高温长时间也不好。
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爱情来得快去得也快，只有猪肉卷是永恒的！
11楼2008-05-31 09:23:38
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jon0901327

新虫 (初入文坛)
非常感谢各位老师、师兄、师姐们的指导！今天下午我根据您们的指导，再试试。
谢谢！
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12楼2008-06-01 12:28:02
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helenfang

铜虫 (小有名气)
我回收完了跑电泳也没条带，
我最后是用灭菌双蒸水溶解的，点样时也没浮上来。
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13楼2008-08-21 20:48:53
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
回收胶呢有很多的原因会影响回收效率：
1.你的胶要做的厚度合适，能刚好把所有的样品都点下，有没有过多的剩余空间。
2.电泳缓冲液也要新配的，或新稀释的。
3.你初始的样品的浓度量要达到，本来就不太大的量，回收回来也不会很多。
4.在紫外照胶的时候，要快，切胶的时候不要打开紫外，那样会损失很多。
5.水要预热，回收的时候按说明书操作。
6.建议最好用TaKaRa的盒子，其他公司基本靠不住。
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14楼2008-08-22 11:03:50
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复
其实试剂盒的差异不是很明显的，没有哪个商家会去咋自家的牌子。
溶胶后没有必要分开来过吸附柱吧？如果一开始量不大，又分成两份，再损失点，电泳时上样再少点，很有可能是这个结果。
建议还是多多上样50ul也不多，呵呵，然后再切下来的时候尽量不要留下没有DNA的凝胶。洗脱时候可以热热。最后检测的时候多点点儿，别舍不得。
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金币是赌出来的
15楼2008-08-22 11:38:26
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yh_1980

银虫 (小有名气)
你回收之前作的什么实验？是酶切吗？紫外线照射的时候，时间不要太长！
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16楼2008-08-23 20:36:11
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