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chdliusong木虫 (小有名气)
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[求助]
植株Cd亚细胞分布以及化学结合形态测定
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b]Cd 亚细胞分布以及化学结合形态测定 小弟第一次做植物Cd亚细胞分布以及化学结合形态测定，希望做过这方面实验的大侠能给予建设性的指导，每部分各150金币，可追加（50~100）  ，希望完整回答一个或两个问题，不甚感激。问题1 :关于植物Cd亚细胞分布 文献方法（差速分级离心）：先将冷冻的样品倒入研钵中，加入预冷的提取剂（50 mM Tris-HCl，250 mM sucrose 和 1.0 mM C4H10O2S2，pH 7.5），然后迅速研磨成匀浆状。将匀浆用 80 μm 的尼龙滤膜过滤，滤渣即为细胞壁及残渣部分；滤液在 20000 g 下离心 45 min，底层碎片为细胞器组分（液泡除外），上层悬浮液为细胞质组分（含胞质及液泡内高分子和大分子有机物及无机离子）。各组分在 70˚C 烘干至恒重并用 HNO3-HClO4（4:1 v/v）进行消解。用火焰原子吸收分光光度计测定 Cd 含量。采用国家标准参比物质（植物 GBW-07605）进行分析质量控制。 我采用Cd胁迫浓度100μmol/L处理植物，学校火焰原子吸收分光光度计 检出限是0.001-0.1mg/ml。 Q:取鲜样量（叶部，根部）多少合适（植株偏小）？预冷试剂浓度是否需要微调，C4H10O2S2母液配制多大合适，易溶否？离心力，离心时间是否需要微调，离心后转移问题，是否必须全程4℃操作？70˚C烘干 烘箱抑或其它？湿法消解注意事项（没电加热板，普通电炉可否；HF，过氧化氢用量，消解时间参考，颜色问题，消解完全判断及其它）？其它注意事项及大侠心得？ 问题2：植物Cd化学结合形态测定 文献方法（连续浸提法）：I)将样品切碎成细片，II）将样品浸没在 37.5 ml 的提取剂中，并在 30˚C 下保温 18h ， iii）回收提取液，再在离心管中加入 37.5 ml 的相同提取剂，浸提 2 h 后再次回收提取液 ，iv)使用相应的提取剂重复步骤 ii 和iii ，v）将收集的提取液（150 ml）于消解罐中蒸发近干后，用 HNO3-HClO4（4:1 v/v）进行消解，火焰原子吸收分光光度计测定 Cd 含量(提取剂分别为80% 乙醇 ；去离子水；1mol/L NaCl ；2% 醋酸，剩余残渣) Q:鲜样（叶部，根部）用量多少较为合适（植株偏小）？不同提取剂浓度是否已为最佳，提取剂用量是否如上？保温温度，时间是否需要微调，是否同时需要振荡？消解罐如用高脚烧杯代替，需注意什么？ 其它注意事项及大侠心得？ 新的一年，同时祝虫友们心想事成！ |
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