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chdliusong木虫 (小有名气)
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[求助]
植物Cd 亚细胞分布以及化学结合形 态测定
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Cd 亚细胞分布以及化学结合形态测定 小弟第一次做植物Cd亚细胞分布以及化学结合形态测定，希望做过这方面实验的大侠能给予建设性的指导，每部分各150金币，可追加（50~100）  ，希望完整回答一个或两个问题，不甚感激。问题1 :关于植物Cd亚细胞分布 文献方法（差速分级离心）：先将冷冻的样品倒入研钵中，加入预冷的提取剂（50 mM Tris-HCl，250 mM sucrose 和 1.0 mM C4H10O2S2，pH 7.5），然后迅速研磨成匀浆状。将匀浆用 80 μm 的尼龙滤膜过滤，滤渣即为细胞壁及残渣部分；滤液在 20000 g 下离心 45 min，底层碎片为细胞器组分（液泡除外），上层悬浮液为细胞质组分（含胞质及液泡内高分子和大分子有机物及无机离子）。各组分在 70˚C 烘干至恒重并用 HNO3-HClO4（4:1 v/v）进行消解。用火焰原子吸收分光光度计测定 Cd 含量。采用国家标准参比物质（植物 GBW-07605）进行分析质量控制。 我采用Cd胁迫浓度100μmol/L处理植物，学校火焰原子吸收分光光度计 检出限是0.001-0.1mg/ml。 Q:取鲜样量（叶部，根部）多少合适（植株偏小）？预冷试剂浓度是否需要微调，C4H10O2S2母液配制多大合适，易溶否？离心力，离心时间是否需要微调，离心后转移问题，是否必须全程4℃操作？70˚C烘干 烘箱抑或其它？湿法消解注意事项（没电加热板，普通电炉可否；HF，过氧化氢用量，消解时间参考，颜色问题，消解完全判断及其它）？其它注意事项及大侠心得？ 问题2：植物Cd化学结合形态测定 文献方法（连续浸提法）：I)将样品切碎成细片，II）将样品浸没在 37.5 ml 的提取剂中，并在 30˚C 下保温 18h ， iii）回收提取液，再在离心管中加入 37.5 ml 的相同提取剂，浸提 2 h 后再次回收提取液 ，iv)使用相应的提取剂重复步骤 ii 和iii ，v）将收集的提取液（150 ml）于消解罐中蒸发近干后，用 HNO3-HClO4（4:1 v/v）进行消解，火焰原子吸收分光光度计测定 Cd 含量(提取剂分别为80% 乙醇 ；去离子水；1mol/L NaCl ；2% 醋酸，剩余残渣) Q:鲜样（叶部，根部）用量多少较为合适（植株偏小）？不同提取剂浓度是否已为最佳，提取剂用量是否如上？保温温度，时间是否需要微调，是否同时需要振荡？消解罐如用高脚烧杯代替，需注意什么？ 其它注意事项及大侠心得？ 新的一年，同时祝虫友们心想事成！ |
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大家好，我最近也在做亚细胞实验，请问使用文献中的离心速度后得到的物质怎么证明是细胞壁细胞器与可溶性组分?为什么第一次离心后上清液与沉淀难以完全分离?请求各位帮帮忙。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2023-03-26 17:09:42
