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hanhaixingyun金虫 (正式写手)
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[交流]
求教：交错延伸PCR定点突变
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最近做定点突变，引物设计应该没有问题，用的酶是pyrobest DNA polymerase，前面做的较顺，一直到交错延伸都能得到目的大小的片段，但是在做TA克隆的时候就是连不上。已经在此耽误了很久了！ 怀疑是不是在加 A 的时候出了问题:我加A的方法是在PCR程序完全结束后往反应体系中加入适量的普通Taq酶，72度延伸10分钟，不知道这样能否加上A. 在此向各位求教，请大家帮忙提出宝贵意见。万分感谢！！ [search]定点突变[/search] |
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2楼2008-05-30 15:22:55
