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柳弯儿

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by woshiyeda at 2014-12-28 22:25:08
常使用低一点的电压，样品不要太浓...

11楼2014-12-30 20:02:37
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柳弯儿

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-12-29 10:54:25
建议：样品先用RNase和protease消化，再跑电泳，看你的图似乎DNA降解比较严重，理论上基因组DNA应该是靠近加样孔附近有一条带，最好优化一下DNA提取过程。

能不能指导下  DNA降解原因可能有什么呢？我也查了很多，可是没头绪……这样的DNA不改进方法的话，做PCR有影响吗？
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12楼2014-12-30 20:04:03
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柳弯儿

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-12-29 10:54:25
建议：样品先用RNase和protease消化，再跑电泳，看你的图似乎DNA降解比较严重，理论上基因组DNA应该是靠近加样孔附近有一条带，最好优化一下DNA提取过程。

这样的DNA不改进方法的话，做PCR有影响吗？
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13楼2014-12-30 20:04:45
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 柳弯儿 at 2014-12-30 20:04:45
这样的DNA不改进方法的话，做PCR有影响吗？...

我是做家蚕的，血液DNA含量很低的，你为什么要用血液提取呢，而且人体血液只有血细胞有DNA，而含量最多的红细胞又是没有细胞核的，所以提取DNA血液不是很好的材料，如果非要用，建议将血细胞富集一下，将血液离心沉淀，去掉血清，多富集几次，增加血细胞量，之后这样操作：
加 600 μL 的DNA 抽提液，充分研磨，转入1.5 mL 离心管，【加1 μL RNA 酶（20μg/mL）37 ℃消化1 h，再加入10 μL 蛋白酶K（20 μg/mL）55 ℃消化2 h】，加等体积tris平衡酚，充分混匀12000rpm离心15分钟，取上清，加等体积tris平衡酚，充分混匀12000rpm离心15分钟，取上清加等体积氯仿，充分混匀后12000rpm离心15分钟，取上清加2倍体积无水乙醇和1/10体积3 M的NaAc，充分混匀，12000rpm离心5分钟，弃上清，75%乙醇洗涤，干燥后加TE缓冲液溶解。

DNA 抽提液：
1 M Tris（pH 8.0） 5 mL
0.5 M EDTA（pH 8.0） 100 mL
10 % SDS 25 mL
ddH2O Up to 500 mL
TE 缓冲液：
1 M Tris-HCl（pH 8.0） 5 mL
0.5 M EDTA（pH 8.0） 1 mL
氯仿（防霉） 0.5—1 mL（相对于500mL）
ddH2O Up to 500 mL

希望对你有帮助
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没有做不到，只有想不到！
14楼2014-12-31 12:49:43
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 柳弯儿 at 2014-12-30 20:04:45
这样的DNA不改进方法的话，做PCR有影响吗？...

上贴中加【】部分可以省略，这样的DNA做PCR是可以的，PCR对模板要求不高的
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没有做不到，只有想不到！
15楼2014-12-31 12:51:19
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马小瓜

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

应该是DNA降解造成的拖尾，在提取过程中应该注意不要剧烈震动，另外需要酶解的步骤，尽量要快速完成，减少过多的孵育时间
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16楼2014-12-31 12:57:17
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