应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 哪位大神帮我看看电泳的结果啊……急急急
162/2返回列表上一页12
查看: 1858  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

柳弯儿

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by woshiyeda at 2014-12-28 22:25:08
常使用低一点的电压，样品不要太浓...

11楼2014-12-30 20:02:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柳弯儿

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-12-29 10:54:25
建议：样品先用RNase和protease消化，再跑电泳，看你的图似乎DNA降解比较严重，理论上基因组DNA应该是靠近加样孔附近有一条带，最好优化一下DNA提取过程。

能不能指导下  DNA降解原因可能有什么呢？我也查了很多，可是没头绪……这样的DNA不改进方法的话，做PCR有影响吗？
赞一下 回复此楼
12楼2014-12-30 20:04:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柳弯儿

新虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-12-29 10:54:25
建议：样品先用RNase和protease消化，再跑电泳，看你的图似乎DNA降解比较严重，理论上基因组DNA应该是靠近加样孔附近有一条带，最好优化一下DNA提取过程。

这样的DNA不改进方法的话，做PCR有影响吗？
赞一下 回复此楼
13楼2014-12-30 20:04:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 柳弯儿 at 2014-12-30 20:04:45
这样的DNA不改进方法的话，做PCR有影响吗？...

我是做家蚕的，血液DNA含量很低的，你为什么要用血液提取呢，而且人体血液只有血细胞有DNA，而含量最多的红细胞又是没有细胞核的，所以提取DNA血液不是很好的材料，如果非要用，建议将血细胞富集一下，将血液离心沉淀，去掉血清，多富集几次，增加血细胞量，之后这样操作：
加 600 μL 的DNA 抽提液，充分研磨，转入1.5 mL 离心管，【加1 μL RNA 酶（20μg/mL）37 ℃消化1 h，再加入10 μL 蛋白酶K（20 μg/mL）55 ℃消化2 h】，加等体积tris平衡酚，充分混匀12000rpm离心15分钟，取上清，加等体积tris平衡酚，充分混匀12000rpm离心15分钟，取上清加等体积氯仿，充分混匀后12000rpm离心15分钟，取上清加2倍体积无水乙醇和1/10体积3 M的NaAc，充分混匀，12000rpm离心5分钟，弃上清，75%乙醇洗涤，干燥后加TE缓冲液溶解。

DNA 抽提液：
1 M Tris（pH 8.0） 5 mL
0.5 M EDTA（pH 8.0） 100 mL
10 % SDS 25 mL
ddH2O Up to 500 mL
TE 缓冲液：
1 M Tris-HCl（pH 8.0） 5 mL
0.5 M EDTA（pH 8.0） 1 mL
氯仿（防霉） 0.5—1 mL（相对于500mL）
ddH2O Up to 500 mL

希望对你有帮助
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
14楼2014-12-31 12:49:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 柳弯儿 at 2014-12-30 20:04:45
这样的DNA不改进方法的话，做PCR有影响吗？...

上贴中加【】部分可以省略，这样的DNA做PCR是可以的，PCR对模板要求不高的
赞一下 回复此楼
没有做不到，只有想不到！
15楼2014-12-31 12:51:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马小瓜

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

应该是DNA降解造成的拖尾，在提取过程中应该注意不要剧烈震动，另外需要酶解的步骤，尽量要快速完成，减少过多的孵育时间
赞一下 回复此楼
16楼2014-12-31 12:57:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 柳弯儿 的主题更新
162/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕找调剂 +4 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 4/200 2026-03-24 17:45 by dick_runner
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +3 哈哈157349 2026-03-21 3/150 2026-03-24 14:11 by zhyzzh
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 07化学280分求调剂 +4 722865 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:01 by chixmc
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 10/500 2026-03-23 10:41 by Iveryant
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭