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numb123

新虫 (小有名气)

[求助] RNA提取 已有2人参与

请教各位大神，RNA提取材料一定要新鲜的吗？trizol一般1ml加多少量的样品？我做的是植物花粉，提了好几次电泳结果都不好～想请教一下，RNA提取过程有什么需要特别注意的地方？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-12-25 19:42:37
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444565008qq

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-26 16:48:39
可以不是新鲜，但是得是-80摄氏度保存，1ml加0.2g左右样品，仪皿高温灭菌，动作要迅速，容易RNA降解，尽量少说话，到处都存在RNA酶，所以要特别注意
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2楼2014-12-26 13:33:27
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未知时光

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-26 16:48:47
收集到材料之后，最好能马上进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃。在制备RNA时，将储存的材料取出，立即加入液氮研磨的方式打破细胞。1ml 的Trizol能裂解100mg左右的组织。
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我想起那天夕阳下的奔跑,那是我逝去的青春。
3楼2014-12-26 14:21:05
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numb123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 未知时光 at 2014-12-26 14:21:05
收集到材料之后，最好能马上进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃。在制备RNA时，将储存的材料取出，立即加入液氮研磨的方式打破细胞。1ml 的Trizol能裂解100mg左右的组织。

谢谢～我想问花粉也需要液氮冷冻以后-80储存吗？

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4楼2014-12-28 14:31:24
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numb123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 444565008qq at 2014-12-26 13:33:27
可以不是新鲜，但是得是-80摄氏度保存，1ml加0.2g左右样品，仪皿高温灭菌，动作要迅速，容易RNA降解，尽量少说话，到处都存在RNA酶，所以要特别注意

谢谢

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5楼2014-12-28 14:31:46
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未知时光

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by numb123 at 2014-12-28 14:31:24
谢谢～我想问花粉也需要液氮冷冻以后-80储存吗？
...

对的，除杂质及残余花药后分装并于-80℃保存。
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我想起那天夕阳下的奔跑,那是我逝去的青春。
6楼2014-12-28 15:06:08
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numb123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 未知时光 at 2014-12-28 15:06:08
对的，除杂质及残余花药后分装并于-80℃保存。...

谢谢

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7楼2014-12-28 18:03:43
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numb123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 未知时光 at 2014-12-28 15:06:08
对的，除杂质及残余花药后分装并于-80℃保存。...

我想问一下，新鲜的花采回来都是要在硅胶里干燥的，如果要做RNA干燥的过程是不是也会降解啊？不干燥的话要怎么把花药和杂质去掉呢？谢谢

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8楼2014-12-28 18:17:43
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