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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 想把肺癌组织送去做DNA二代测序，请问需要取多少（或多大）的肺癌组织？
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wu8089

铜虫 (初入文坛)

[求助] 想把肺癌组织送去做DNA二代测序，请问需要取多少（或多大）的肺癌组织？ 已有2人参与

还有一个问题，如果我想从肺癌组织里提DNA，然后再送去二代测序。我需要切多大一块组织用来提DNA啊？ 请好心人帮帮忙。不胜感谢！
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1楼 2014-12-22 15:15:43
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bio-li

金虫 (小有名气)
你是做外显子测序吗
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你不能解决问题，你就会成为问题
2楼2014-12-23 09:59:56
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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wu8089(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-23 19:10:29
wu8089: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-12-28 23:03:19
测序是看dna含量来的，通常是1ug，一些试剂能做到100-200ng，但是你要多送一点，因为他们还需要做质控，所以你问多大组织，真没法说啊。
蜡片7、8片的样子就肯定够了。
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3楼2014-12-23 11:51:31
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wu8089

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bio-li at 2014-12-23 09:59:56
你是做外显子测序吗

是啊，外显子测序
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4楼2014-12-23 15:01:11
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wu8089

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-23 11:51:31
测序是看dna含量来的，通常是1ug，一些试剂能做到100-200ng，但是你要多送一点，因为他们还需要做质控，所以你问多大组织，真没法说啊。
蜡片7、8片的样子就肯定够了。

送去测一次序，最少需要几片蜡片啊。
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5楼2014-12-23 15:05:23
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bbqlhb

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wu8089 at 2014-12-23 15:05:23
送去测一次序，最少需要几片蜡片啊。...

每个公司不一样，因为试剂要求不同，你问他们肯定会给你答复的
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6楼2014-12-23 15:33:35
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wu8089

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-23 15:33:35
每个公司不一样，因为试剂要求不同，你问他们肯定会给你答复的...

那如果自己提取DNA 再送去测序，那需要切多大的组织啊
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7楼2014-12-23 15:43:21
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bbqlhb

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wu8089 at 2014-12-23 15:43:21
那如果自己提取DNA 再送去测序，那需要切多大的组织啊...

我不知道你怎么切啊。。是病人的肺还是试验用的肺？是准备研磨还是切片。
应该都是尽可能少，取到病变部位就好，没提取过组织，都是提取蜡片的。
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8楼2014-12-23 15:49:53
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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wu8089: 金币+6, ★★★很有帮助 2014-12-28 23:03:09
组织中提取基因组DNA外显子的话比较简单，火柴头大小的组织块即可。如果怕DNA浓度低，多加一些组织液没关系，不过组织裂解液、蛋白酶K什么的就得相应增加。要是提全RNA然后反转录得到cDNA再PCR也可以，不过需要先设计好反转录引物。两种方法的相关试剂盒市面有售。接下进行测序的话，再设计相关基因片段的引物，产物最好大于200 bp，否则容易测序失败。
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9楼2014-12-23 22:25:45
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