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wu8089

铜虫 (初入文坛)

[求助] 想把肺癌组织送去做DNA二代测序,请问需要取多少(或多大)的肺癌组织? 已有2人参与

还有一个问题,如果我想从肺癌组织里提DNA,然后再送去二代测序。我需要切多大一块组织用来提DNA啊? 请好心人帮帮忙。不胜感谢!
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bio-li

金虫 (小有名气)

你是做外显子测序吗
你不能解决问题,你就会成为问题
2楼2014-12-23 09:59:56
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wu8089(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-23 19:10:29
wu8089: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-12-28 23:03:19
测序是看dna含量来的,通常是1ug,一些试剂能做到100-200ng,但是你要多送一点,因为他们还需要做质控,所以你问多大组织,真没法说啊。
蜡片7、8片的样子就肯定够了。
3楼2014-12-23 11:51:31
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wu8089

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bio-li at 2014-12-23 09:59:56
你是做外显子测序吗

是啊,外显子测序
4楼2014-12-23 15:01:11
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wu8089

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-23 11:51:31
测序是看dna含量来的,通常是1ug,一些试剂能做到100-200ng,但是你要多送一点,因为他们还需要做质控,所以你问多大组织,真没法说啊。
蜡片7、8片的样子就肯定够了。

送去测一次序,最少需要几片蜡片啊。
5楼2014-12-23 15:05:23
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wu8089 at 2014-12-23 15:05:23
送去测一次序,最少需要几片蜡片啊。...

每个公司不一样,因为试剂要求不同,你问他们肯定会给你答复的
6楼2014-12-23 15:33:35
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wu8089

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-23 15:33:35
每个公司不一样,因为试剂要求不同,你问他们肯定会给你答复的...

那如果自己提取DNA 再送去测序,那需要切多大的组织啊
7楼2014-12-23 15:43:21
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wu8089 at 2014-12-23 15:43:21
那如果自己提取DNA 再送去测序,那需要切多大的组织啊...

我不知道你怎么切啊。。是病人的肺还是试验用的肺?是准备研磨还是切片。
应该都是尽可能少,取到病变部位就好,没提取过组织,都是提取蜡片的。
8楼2014-12-23 15:49:53
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oO晶锅Oo

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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wu8089: 金币+6, ★★★很有帮助 2014-12-28 23:03:09
组织中提取基因组DNA外显子的话比较简单,火柴头大小的组织块即可。如果怕DNA浓度低,多加一些组织液没关系,不过组织裂解液、蛋白酶K什么的就得相应增加。要是提全RNA然后反转录得到cDNA再PCR也可以,不过需要先设计好反转录引物。两种方法的相关试剂盒市面有售。接下进行测序的话,再设计相关基因片段的引物,产物最好大于200 bp,否则容易测序失败。
9楼2014-12-23 22:25:45
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