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paulajjh木虫 (著名写手)
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[交流]
酶切后连接不上怎么办???
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各位虫友,大家好.我的酶切位点为NdeⅠ与XhoⅠ,很多人都说这两个位点切出来后,很难连接.我已经做了很多次,每次只有阴性板长菌,阳性板从来没有长出过. 第一次,我用的是单酶切,先NdeⅠ,后XhoⅠ,转入BL21与DH52,阴性板为不加PCR的质粒自连.用Amp板筛选. 后几次都是先NdeⅠ,再NdeⅠ与XhoⅠ一起切,还只是阴板长菌. 各位高手,能否给我分析一下原因吗?给我些建议和帮助好吗? 谢谢大家了 |
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