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液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节
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液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节 一．样品预处理方法 样品预处理应包括进样前的一切操作。除了称重、溶解、稀释等步骤外，样品需要：①过滤；②萃取；③衍生化（柱前衍生）；④液相色谱（低压柱层析）。这些操作可以是手工进行或实行自动化操作。样品预处理的目的是除去干扰物、增加检测器灵敏度（富集）、保护色谱柱等。样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障，其中样品萃取是关键的一步，要从大量的干扰物中萃取出微量组分难度极大。 有些样品经预处理后还不能作进样分析，需进行衍生化处理，使一些无紫外吸收或无荧光的组分，经过衍生化后能用紫外和荧光检测器检测，这样既提高了灵敏度，又改善了分离度（质量变化）。 样品预处理的同时也会带来一些问题，如样品损失、样品被污染、衍生化反映不完全或多种反应物生成等。衍生反应常会影响试验的精确度，或者在整个样品预处理过程中带来误差。 用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒，有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头。处理好的样品在准备上柱前应对准光线摇动，检查样品溶液中有无颗粒。只要看到颗粒、混浊或乳化，就应过滤一下，过滤膜要能截留住0.5μm以上的颗粒，样品过滤的过程中可能引起：样品被污染,因过滤吸附降低样品组分的含量，样品溶剂挥发引起误差。 萃取的目的是从共溶的样品介质中分离出被分析的组分，或者减少损坏柱的物质（如蛋白质等）和干扰物。 一般采用有机溶剂萃取，要求萃取用的溶剂毒性、低挥发性好、杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。萃取后一般可直接进样，有时需要浓缩或吹干浓缩，再用定体积的液体或流动相溶解进样。这样增加了样品浓度，提高了灵敏度，同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰。 在萃取是要考虑样品分子的溶解能力。除了脂溶性和水溶性组分外，还有用脂溶性的组分制成水溶性的盐。萃取方法如下： 1．水溶性样品 ①酸性组分及生成的盐萃取方法：有机溶剂萃取杂质后调成酸性，再加有机溶剂萃取或进样，或在N2流下吹干，用适当的溶剂溶解后进样。 ②碱性组分及生成的盐萃取方法：有机溶剂萃取杂质后调成碱性，再加有机溶剂萃取或进样，或在N2流下吹干，用适当的溶剂溶解后进样。 ③中性组分萃取方法：有机溶剂萃取杂质后，直接用反相色谱法分析。 2．脂溶性组分萃取方法：有机溶剂萃取或进样，或在N2流下吹干，用适当的溶剂溶解后进样。 二、样品预处理过程中的主要故障与解决办法 1．色谱图中出现无关的峰，原因有可能是样品过滤器带来污染，解决方法如下： ①将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验。 ②改变过滤器类型。 ③采用交替清洗技术。 2．一些或全部化合物的峰比预期的小，尤其是低浓度的样品，原因可能是样品过滤器表面吸附下降，解决方法如下： ①改变过滤器类型。 ②严格按相同条件处理所用样品。 ③采用交替清洗技术。 3．回收率太低或差，原因可能是萃取不完全，解决方法如下： ①增加萃取时间，使用热溶剂。 ②修改清洗方法 4．色谱峰变宽，柱寿命缩短，原因可能是样品带来的干扰与污染，应改进清洗方法。 5．精度差，原因可能是回收不完全，解决方法如下： ①改进或替换衍生化、分离、萃取或其他条件。 ②用自动化预处理装置提高精度。 总之，对分析仪器来说，避免故障的最主要的做法是正确的操作和调节，切忌盲目操作，对核心部位如离子室、微电流放大器等减少震动和碰撞，保证绝缘，并减少各种系统误差要注意以上要点，但还是注意日常的仪器保养，色谱柱子的维护，仪器室保持清洁，这样才能使液相色谱处于最佳工作状态，在分析中发挥其重要的作用。 |
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